IL-37調(diào)控Th17-Treg免疫失衡在小鼠病毒性心肌炎中的作用研究.pdf

1、研究背景
　　病毒性心肌炎是一種以心肌炎癥浸潤為特征的異質(zhì)性疾病，多伴隨自身免疫系統(tǒng)的過度應(yīng)答。目前各種干預(yù)措施對心肌炎的治療效果均不顯著。IL-37作為新發(fā)現(xiàn)的IL-1細(xì)胞因子家族新成員，是一種負(fù)性免疫調(diào)節(jié)因子，可以通過調(diào)節(jié)Th17/Treg免疫平衡而改善多種自身免疫疾病的炎癥反應(yīng)。心肌炎的發(fā)病機(jī)制與Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg細(xì)胞）之間的免疫失衡有密切關(guān)聯(lián)。IL-37在心肌炎中能否通過調(diào)節(jié)Th17/Treg免疫失衡而改

2、善病情尚未得到論證。
　　目的
　　在本實驗中，我們構(gòu)建了小鼠CVB3病毒性心肌炎模型，以重組人IL-37對其進(jìn)行干預(yù)。通過觀察小鼠的一般情況、心肌組織病理改變、心臟超聲參數(shù)、脾臟Th17/Treg細(xì)胞比例、血清炎性因子等指標(biāo)變化，研究IL-37對病毒性心肌炎的調(diào)節(jié)作用，同時對IL-37的治療機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步的探討，為病毒性心肌炎的臨床治療尋找新的方法。
　　方法
　　將四周齡雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為對照組、實

3、驗組（病毒組）和干預(yù)組（IL-37組）。對照組小鼠腹腔注射100ulPBS和200ul生理鹽水;病毒組小鼠腹腔注射100ul用PBS稀釋的CVB3(105 TCID50)和200ul生理鹽水;IL-37組小鼠腹腔注射100ul用PBS稀釋的CVB3(105 TCID50)和200ul溶有IL-37(2ug)的生理鹽水，并定該日為第0天。觀察各組小鼠的一般情況，如體重變化，生存率，進(jìn)食情況，毛色變化，精神狀態(tài)等。于第7天和第10天分批處死

4、小鼠，取小鼠心臟石蠟切片行HE染色和Masson染色分別觀察炎癥細(xì)胞浸潤和間質(zhì)纖維化，并用定量方法進(jìn)行評價;行心臟超聲檢查，對小鼠心功能進(jìn)行定量評價;流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾臟Th17、Treg細(xì)胞比例，對Th17/Treg免疫平衡進(jìn)行評價，進(jìn)而推斷IL-37改善心肌炎進(jìn)展的機(jī)制;ELISA測定小鼠血清中Th17和Treg細(xì)胞相關(guān)的炎性因子濃度，如IL-17A、IL-6和IL-10;實時定量Realtime-PCR檢測與Th17和Treg細(xì)

5、胞相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子RORγt、Foxp3的表達(dá)，以及IL-17A、IL-6和IL-10的表達(dá)，進(jìn)一步明確IL-37的作用機(jī)制。
　　結(jié)果
　　IL-37顯著提高心肌炎小鼠的生存率、體重并改善心肌組織病理學(xué)變化，對小鼠脾臟中Th17和Treg細(xì)胞的分化分別起到抑制和活化作用;在小鼠心肌和血清中，IL-37降低Th17細(xì)胞相關(guān)因子RORγt、IL-6和IL-17A的表達(dá)，提高Treg細(xì)胞相關(guān)因子Foxp3和IL-10的表達(dá)。