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1、單位代碼:10165遼寧師范大學(xué)博士研究生學(xué)位論文題目:中國(guó)林蛙抗菌肽chensinin1b對(duì)革蘭氏陰性菌的殺菌機(jī)制及抑制LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的研究,~●P一●●●●●一一1ltle:1hemechanismagainstgramnegativebacterlaandtheettect0nlipopolysacchaftde—inducedinflammatoryresponsesofchensinin—lb,anantimicrobia
2、lpeptideanaloguefromChinesebrownfrog,Ranachensinensis作者姓名:學(xué)科、專業(yè):研究方向:導(dǎo)師姓名:細(xì)胞生化2016年5月遼寧師范大學(xué)博士學(xué)位論文摘要脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)是革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜上的主要成分,不但能夠阻礙抗菌藥物進(jìn)入細(xì)菌內(nèi)部發(fā)揮抗菌作用,而且還是引發(fā)炎癥反應(yīng)的主要誘因。失控的局部炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致全身性炎癥或膿毒癥等疾病,對(duì)組織和器官引起不同程度
3、的損傷,嚴(yán)重的甚至?xí)?dǎo)致生物體死亡。目前還沒(méi)有開(kāi)發(fā)出能夠有效中和LPS的成熟藥物??咕膩?lái)源廣泛,作為生物體先天免疫系統(tǒng)的重要成員,具有廣譜抗菌活性且不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn),某些抗菌肽還具有中和LPS及調(diào)節(jié)免疫功能,是研發(fā)拮抗LPS抗炎藥物的理想候選。Chensinin1是本實(shí)驗(yàn)室從中國(guó)林蛙(Ranachensinensis)皮膚分泌物中分離純化得到的一種含有18個(gè)氨基酸的短肽,該抗菌肽具有分子量小,陽(yáng)離子性強(qiáng)等特征,對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有較好
4、的抗菌活性。前期研究中對(duì)chensinin1進(jìn)行改造,以疏水性較強(qiáng)的色氨酸替換了疏水性較弱的甘氨酸,并調(diào)整氨基酸序列增強(qiáng)了其兩親性得到了它的改造肽chensinin1b,其抗菌活性尤其是對(duì)革蘭氏陰性菌的抗菌能力與模板肽相比有顯著的提高。本文首先研究了chensinin1b對(duì)革蘭氏陰性菌選擇性殺菌活性的分子機(jī)制。NPN檢測(cè)chensinin1b對(duì)細(xì)菌細(xì)胞壁外膜的滲透性,結(jié)果表明chensinin1b對(duì)大腸桿菌外膜有較強(qiáng)的滲透能力,chen
5、sinin1相對(duì)較弱。制備去除細(xì)胞壁外膜的大腸桿菌原生質(zhì)體,兩種抗菌肽對(duì)原生質(zhì)體的去極化作用和抗菌活性與大腸桿菌相比均有不同程度提高,而對(duì)LPS環(huán)境中的原生質(zhì)體的去極化及抗菌能力又有所下降,其中chensinin1下降的程度較chensinin1b更大,說(shuō)明chensinin1無(wú)法像chensinin1b一樣作用于LPS,提示chensinin1和chensinin1b對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌抗菌活性的不同,是由于二者對(duì)革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜中
6、LPS作用程度不同引起的。等溫滴定量熱(isothermaltitrationcalorimetry。ITC)實(shí)驗(yàn)和Zeta電勢(shì)實(shí)驗(yàn)測(cè)定chensinin1b與LPS之間的相互作用。ITC顯示,chensinin1b與LPS的結(jié)合是一個(gè)先放熱后吸熱的過(guò)程,先后由焓和熵驅(qū)動(dòng)。表明chensinin1b先以靜電作用和LPS吸附結(jié)合,再以疏水作用插入到LPS中。通過(guò)分析熱力學(xué)參數(shù),得出結(jié)論chensinin1b的結(jié)合系數(shù)較大,說(shuō)明與LPS有較
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