版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、第一部分 microRNA-92a通過靶向MKK4負(fù)向調(diào)節(jié)TLR誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)
天然免疫是機體防御病原體入侵的第一道有效防線,病毒、細(xì)菌等致病性病原微生物一旦入侵機體,將迅速啟動機體的天然免疫應(yīng)答,觸發(fā)炎癥反應(yīng)。在天然免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞,樹突狀細(xì)胞等對病原微生物的識別過程中,Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)作為一種模式識別受體發(fā)揮著重要作用。TLRs特異性識別病原體中特定的分子結(jié)構(gòu),激
2、活其下游的MyD88或TRIF依賴的信號通路,激活MAPK、NF-κB或者IRF3信號,最終激活天然免疫細(xì)胞產(chǎn)生炎癥細(xì)胞因子和Ⅰ型干擾素,構(gòu)成機體免疫系統(tǒng)抵御病原體入侵的第一道屏障。MicroRNA(miRNA)是近年來發(fā)現(xiàn)的一類高度保守的長度約為21~23個bp的非編碼寡聚核苷酸,其功能主要是通過與mRNA的3'非編碼區(qū)(3'UTR)特異靶位點相互作用從而負(fù)向調(diào)控mRNA的翻譯。miRNA參與調(diào)控了多種生物學(xué)過程,如生長、發(fā)育、分化、
3、腫瘤的發(fā)生等。同樣,miRNA對免疫應(yīng)答和免疫細(xì)胞的分化和功能也起著十分重要的調(diào)控作用。已有多篇關(guān)于miRNA參與調(diào)控天然免疫應(yīng)答的相關(guān)報道,如miRNA-146、miRNA-101分別在炎癥反應(yīng)中起著負(fù)向和正向的調(diào)控作用。
miRNA-92a已被報道在腫瘤和血管生成方面起著重要作用,但其在天然免疫中的作用和意義未見報道。我們發(fā)現(xiàn)用多種TLR配體,如TLR2、TLR3、TLR4的配體LPS,PGN,PolyI∶C分別刺激小鼠原
4、代腹腔巨噬細(xì)胞后, miR-92a的表達(dá)水平在短時間內(nèi)下降。我們進一步檢測了miR-92a在MyD88或TRIF缺失的巨噬細(xì)胞中經(jīng)TLR配體刺激后的表達(dá)變化,發(fā)現(xiàn)miR-92a的表達(dá)下降同時由TLR信號途徑中的MyD88,TRIF通路所誘導(dǎo)。之后,我們將合成的siRNA轉(zhuǎn)染到巨噬細(xì)胞中,來模擬內(nèi)源性miR-92a的功能或特異性抑制其作用來進一步研究miR-92a的功能。研究發(fā)現(xiàn)miR-92a的過表達(dá)可明顯降低LPS誘導(dǎo)的炎癥因子TNF-
5、α和IL-6mRNA和蛋白表達(dá)水平,同時減低了JNK和C-JUN的磷酸化水平。相反地,抑制miR-92a功能后,巨噬細(xì)胞TNF-a和IL-6的表達(dá)增加,JNK/C-JUN信號通路增強。由于miRNA主要通過調(diào)控靶基因的表達(dá)進而發(fā)揮生物學(xué)功能,我們進一步通過miRNA靶點預(yù)測網(wǎng)站來尋找潛在的使miR-92a發(fā)揮上述功能的靶點分子。熒光素酶報告基因和蛋白檢測等實驗結(jié)果表明miR-92a可直接靶向抑制MKK4的表達(dá),而MKK4是TLR信號中促
6、進JNK活化的關(guān)鍵中間信號分子。接著,我們進一步證實了MKK4的功能,干擾MKK4后,JNK/C-JUN信號通路減弱,繼而降低炎癥因子TNF-α和IL-6的表達(dá)和分泌。
綜上所述,miR-92a在巨噬細(xì)胞TLR配體誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中,可通過靶向抑制MKK4,從而降低JNK/C-JUN信號通路的活化,最終抑制炎癥因子的表達(dá)。該研究結(jié)果為巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答的調(diào)控機制增添了新的認(rèn)識,并可能為炎癥引起的免疫相關(guān)性疾病的診治提供新的靶標(biāo)。<
7、br> 第二部分 microRNA-33通過靶向ABCA1和ABCG1促進TLR誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)
TLRs(Toll-like receptors)是一類重要的病原分子模式PAMPs識別受體,在天然細(xì)胞如巨噬細(xì)胞,樹突狀細(xì)胞中廣泛表達(dá)。TLRs特異性識別病原體中特定的分子結(jié)構(gòu),激活其下游的MyD88或TRIF依賴的信號通路,激活MAPK、NF-κB或者IRF3信號,最終激活天然免疫細(xì)胞產(chǎn)生炎癥細(xì)胞因子和Ⅰ型干擾素。mi
8、croRNAs(miRNAs)是一種進化上保守的長約21~23個核苷酸的非編碼RNA,其通過與靶基因的3'非翻譯區(qū)間結(jié)合在轉(zhuǎn)錄后水平抑制靶基因表達(dá)。miRNA在生物體內(nèi)發(fā)揮著重要的調(diào)控機制同樣,同樣對免疫應(yīng)答和免疫細(xì)胞的分化和功能也起著十分重要的調(diào)控作用。
由于在脂類代謝方面的關(guān)鍵作用,miR-33最近幾年受到了研究者的廣泛關(guān)注,但其在天然免疫中的作用和意義尚不清楚。我們發(fā)現(xiàn)用多種TLR配體,如TLR2、TLR3、TLR4的配
9、體HKLM,LPS,PolyI∶C分別刺激小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞后,miR-33的表達(dá)水平在刺激后期下降。我們進一步檢測了miR-33在MyD88或TRIF缺失的巨噬細(xì)胞中經(jīng)TLR配體刺激后的表達(dá)變化,發(fā)現(xiàn)miR-33的表達(dá)下降主要受到TLR信號途徑中的TRIF通路所調(diào)控。之后,我們將合成的siRNA轉(zhuǎn)染到巨噬細(xì)胞中,來模擬內(nèi)源性miR-33的功能或特異性抑制其作用來作進一步的研究。研究發(fā)現(xiàn)miR-33的過表達(dá)可明顯增加LPS誘導(dǎo)的炎癥因
10、子TNF-α和IL-6 mRNA和蛋白表達(dá)水平。相反地,抑制miR-33后,巨噬細(xì)胞TNF-α和IL-6的表達(dá)下降。膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白ABCA1和ABCG1被報道是miR-33的直接靶點,且其在炎癥反應(yīng)中起著負(fù)向調(diào)控的作用。由此,我們猜測miR-33可通過靶基因ABCA1和ABCG1對炎癥起到調(diào)控作用。為此,我們首先驗證了在原代巨噬細(xì)胞中,miR-33可直接作用于ABCA1和ABCG1,使其mRNA和蛋白水平下降。ABCA1-/-,ABCG
11、1-/-小鼠來源的巨噬細(xì)胞中,過表達(dá)miR-33對炎癥因子的正向調(diào)控作用減弱。同時,巨噬細(xì)胞內(nèi)ABCA1和ABCG1的表達(dá)增加也減弱了miR-33對炎癥因子的正向調(diào)控作用。接著,我們進一步研究了miR-33調(diào)控TLR觸發(fā)的炎癥應(yīng)答的機制。ABCA1和ABCG1協(xié)同負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運細(xì)胞內(nèi)的膽固醇到細(xì)胞外,從而降低細(xì)胞膜內(nèi)游離膽固醇的含量,進而影響脂筏的含量,抑制TLR信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)。因此,我們檢測了miR-33對細(xì)胞膜脂筏含量的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-
12、33可增加細(xì)胞膜內(nèi)的脂筏含量,從而增強TLR信號,主要是NF-κB信號,最終促進炎癥因子TNF-a和IL-6的表達(dá)和分泌。脂筏結(jié)構(gòu)干擾化合物處理細(xì)胞后,miR-33對炎癥因子的調(diào)控作用減弱,進一步驗證了miR-33可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞膜脂筏的含量來調(diào)控TLR觸發(fā)的炎癥應(yīng)答。另一方面,miR-33也可抑制抗炎因子IL-10的表達(dá),協(xié)同促進炎癥因子的表達(dá)。
綜上所述,在巨噬細(xì)胞中,可能存在以下調(diào)控網(wǎng)絡(luò):LPS刺激后,TRIF信號通路可降
13、低miR-33的表達(dá),miR-33的下降釋放了對靶基因ABCA1和ABCG1的抑制,從而促進細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇的外流,膜內(nèi)脂筏含量降低,TLR信號減弱。另一方面,miR-33下降后,抗炎因子IL-10的表達(dá)增加,兩者協(xié)同抑制炎癥因子的表達(dá)。本課題的研究結(jié)果為巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答的調(diào)控機制增添了新的認(rèn)識,提示了膽固醇與炎癥之間存在的關(guān)系,為炎癥引起的免疫相關(guān)性疾病的診治提供新的思路。
第三部分IL-9對PAMPs誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)
14、的調(diào)控作用以及機制研究
Interleukin9(IL-9)起初最為一種T細(xì)胞和肥大細(xì)胞的生長因子被研究者所認(rèn)識。近十幾年的研究揭示了IL-9更多的生物學(xué)功能以及產(chǎn)生機制,引起了研究者的廣泛關(guān)注。初始CD4+T細(xì)胞在體外TGF-β和IL-4培養(yǎng)下能高分泌IL-9,分化成Th9細(xì)胞。
IL-9通過與IL-9受體結(jié)合發(fā)揮其生物學(xué)活性。IL-9能促進T細(xì)胞和肥大生長之外,對B細(xì)胞、固有淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等的生長和功能也具有
15、調(diào)控作用。IL-9能夠促進LPS誘導(dǎo)激活的人巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞分泌TGF-β,并降低TNF-α的表達(dá),從而抑制突發(fā)性氧化作用。IL-9也能抑制APC誘導(dǎo)的Th1型免疫應(yīng)答。
IL-9在各類疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著不同的作用。在超敏反應(yīng)和自身免疫性病中,IL-9作為一種炎癥分子,能加速疾病的發(fā)展;而在寄生蟲感染和皮膚移植中,IL-9能促進機體清除病原體以及移植物免疫耐受的形成。巨噬細(xì)胞作為炎癥應(yīng)答的主要細(xì)胞,在病原體感染和炎癥反應(yīng)
16、中起著關(guān)鍵的作用。病原菌都有一些保守的特征性分子,稱為病原菌相關(guān)分子模式PAMPs(pathogen-associated molecularpatterns)。細(xì)胞表面的模式識別受體PRRs通過識別病原菌的PAMPs而激發(fā)免疫反應(yīng)。一旦識別了病原體,PRRs就會激活其下游一系列的信號通路,活化天然免疫細(xì)胞產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子和Ⅰ型干擾素等細(xì)胞因子,從而啟動天然免疫應(yīng)答。而目前,IL-9對PAMPs誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答的調(diào)控作用尚未清楚。
17、因此,本研究的目的主要在于了解IL-9是否參與該過程,從而進一步了解IL-9在炎癥疾病中作用。
利用IL-9基因敲除小鼠,我們發(fā)現(xiàn),IL-9-/-小鼠骨髓來源的巨噬細(xì)胞在各類PAMPs刺激下,炎癥因子TNF-α,IL-6,IL-1β的表達(dá)顯著下降。之后,我們單獨用IL-9處理原代巨噬細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)高濃度的IL-9能誘導(dǎo)原代巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-6,TNF-α。同時,用低濃度的IL-9處理能夠增強原代巨噬細(xì)胞對PAMPs誘導(dǎo)的炎癥因子的
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 模式識別受體介導(dǎo)的小鼠附睪天然免疫反應(yīng).pdf
- 人乳腺癌中天然免疫模式識別受體表達(dá)圖式的研究.pdf
- Brd3對病毒及LPS觸發(fā)的天然免疫應(yīng)答的調(diào)控及其機制研究.pdf
- MicroRNA-223、白介素27對巨噬細(xì)胞抗病毒天然免疫應(yīng)答調(diào)控機制的研究.pdf
- RasGRP3和Ca2+調(diào)控TLRs觸發(fā)的天然免疫應(yīng)答及其機制研究.pdf
- CLM3和CLM5促進TOLL樣受體(TLR)觸發(fā)巨噬細(xì)胞天然免疫應(yīng)答反應(yīng)及其相關(guān)分子機制的研究.pdf
- 人工合成β寡糖調(diào)控天然免疫應(yīng)答分子機制的研究.pdf
- 鈣-鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ和MHC Ⅱ類分子對TLR觸發(fā)的巨噬細(xì)胞與樹突狀細(xì)胞天然免疫應(yīng)答反應(yīng)的調(diào)控及其機制研究.pdf
- 模式識別受體介導(dǎo)的小鼠睪丸和附睪的天然抗病毒反應(yīng).pdf
- MicroRNA-27a調(diào)控抗病毒天然免疫應(yīng)答及其機制研究.pdf
- 樹突狀細(xì)胞模式識別受體在種植體相關(guān)免疫反應(yīng)中的作用研究.pdf
- 鯉天然免疫識別受體 TLR1和TLR21的基因克隆及免疫功能的初步研究.pdf
- 哺乳動物先天免疫模式識別受體PRRs適應(yīng)性進化研究.pdf
- 天然免疫應(yīng)答和炎癥
- LAPF和CD11b負(fù)向調(diào)控天然免疫應(yīng)答及其機制研究.pdf
- 樹突細(xì)胞及其模式識別受體與變應(yīng)性鼻炎關(guān)系的研究.pdf
- 肝臟巨噬細(xì)胞天然免疫膜受體的表達(dá)與肝癌的相關(guān)性研究.pdf
- PRRSV對豬肺泡巨噬細(xì)胞天然免疫功能影響的分子機制.pdf
- 病毒免疫逃逸和抗病毒應(yīng)答新機制.pdf
- Notch信號對天然免疫的調(diào)控作用及其機制研究.pdf
評論
0/150
提交評論