慢病毒介導(dǎo)RNAi沉默IL-1I受體對大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎中MAPKs途徑的影響.pdf

1、背景
　　 骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是一種慢性、漸進(jìn)性、退行性關(guān)節(jié)病變,是臨床上最常見的關(guān)節(jié)疾病。隨著各國人口老齡化的到來,骨關(guān)節(jié)疾病日趨增多,隨之帶來的對個(gè)人的生活質(zhì)量影響和對整個(gè)社會的經(jīng)濟(jì)影響是巨大的。
　　 目前認(rèn)為,OA的發(fā)生主要是由于軟骨基質(zhì)的降解和合成長期失衡引起的,主要病理改變是關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)膠原的破壞。研究表明,軟骨局部基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases

2、,RMPs)的異常增高可能是導(dǎo)致軟骨細(xì)胞外基質(zhì)合成和降解失衡的重要原因。細(xì)胞因子學(xué)說目前并不能解釋OA中軟骨破壞的全部原因,但是軟骨的哪個(gè)部位以何種形式發(fā)生退變,都不能脫離IL-1等炎癥介質(zhì)的作用。
　　 IL-1β通過與軟骨細(xì)胞膜上的IL-1 R I結(jié)合,主要通過絲裂素原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)途徑和核因子-κ B(nuclear factor-κ B,NF

3、-κ B)途徑進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo),引起金屬蛋白酶組織抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1)與MMPs之間失衡。
　　 近年來OA的基因治療研究引起了人們極大的關(guān)注,并且有相關(guān)實(shí)驗(yàn)證明了基因治療的可行性。但從現(xiàn)有文獻(xiàn)來看,外源性基因在動物體內(nèi)的長期性和穩(wěn)定性表達(dá)尚未很好解決。
　　 本研究采用大鼠前交叉韌帶切斷和部分內(nèi)側(cè)半月板切除的方法建立OA模型,在

4、關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射慢病毒介導(dǎo)RNAi沉默IL-1Ⅰ型受體,觀察其對關(guān)節(jié)軟骨退行性變及軟骨細(xì)胞中MAPKs途徑的影響。
　　 第一部分慢病毒介導(dǎo)RNAi沉默IL-1Ⅰ型受體對大鼠膝OA關(guān)節(jié)軟骨退行性變的影響
　　 目的：在制作大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎模型的基礎(chǔ)上,觀察慢病毒介導(dǎo)的RNAi沉默IL-1Ⅰ型受體對大鼠骨關(guān)節(jié)炎軟骨退行性變的影響,初步觀察這種治療的作用,以此來探討IL-1在OA中的作用。
　　 材料和方法：40只SD大鼠

5、隨機(jī)分為A～D4組,每組10只。A～C組行單側(cè)前交叉韌帶切斷和內(nèi)側(cè)半月板前1/3切除術(shù),分別于術(shù)后第7和9天,A組關(guān)節(jié)腔中注射慢病毒介導(dǎo)IL-1Ⅰ型受體有效RNA干擾片段,B組注射慢病毒介導(dǎo)IL-1Ⅰ型受體無效RNA干擾片段,C組單純注射生理鹽水。D組為正常動物不做處理。術(shù)后4周處死動物,對關(guān)節(jié)軟骨的狀況進(jìn)行評分。
　　 結(jié)果：大體觀察顯示:經(jīng)RNA干擾的A組軟骨退行性變顯著輕于未經(jīng)RNA干擾的B、C組(P＜0.05,P＜0.0

6、5),但重于D組(P＜0.05)。而B、C兩組間無顯著性差異。
　　 結(jié)論：前交叉韌帶切斷加內(nèi)側(cè)半月板部分切除的方法制作大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型是可行的。慢病毒介導(dǎo)RNA干擾沉默IL-1Ⅰ型受體對關(guān)節(jié)軟骨有保護(hù)作用。
　　 第二部分 MAPKs途徑在大鼠膝OA中的作用
　　 目的：在制作大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎模型的基礎(chǔ)上,觀察慢病毒介導(dǎo)的RNAi沉默IL-1Ⅰ型受體對軟骨組織中MAPKs途徑的影響,以此來探討IL-1和MAPKs

7、在OA中的作用。
　　 材料和方法：將保存在-80℃冰箱中的大鼠膝關(guān)節(jié)取出,分離出膝關(guān)節(jié)軟骨組織,用Western blot方法檢測軟骨組織中IL-1Ⅰ型受體、p38、ERK1/2和JNK1/2等蛋白質(zhì)表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：Western blot檢測顯示,A組IL-1Ⅰ型受體蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著地低于B、C、D組(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01);A組p38蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著低于B、C組(P＜0.05,P＜0