腺病毒介導TGF-β1基因體外轉染自體Hamstring腱重建兔ACL術后腱-骨愈合的形態(tài)學觀察.pdf

1、【目的】
　　觀察腺病毒介導 TGF-β1基因轉染對自體 Hamstring腱重建兔ACL術后腱-骨愈合組織形態(tài)學的影響。
　　【方法】
　　術前構建攜帶 TGF-β1基因的重組腺病毒載體 AdTGFβ1，取新西蘭兔48只，體重2.0±0.4 kg，平均18月齡，隨機分為A、B、C三組，每組16只動物，以兔后肢右膝關節(jié)作為研究對象，自身Hamstring腱作為 ACL替代物。A組采用AdTGFβ1轉染的自體同側Hams

2、tring腱重建ACL，即AdTGFβ1轉染組(實驗組)；B組采用腺病毒空載體AdGFP轉染的自體同側Hamstring腱重建ACL，即AdGFP轉染組(空載體對照組)；C組采用未經(jīng)處理的自體同側Hamstring腱重建ACL，即DMEM處理組(空白對照組)。每組均在2、4、8、12周四個時間點處死4只實驗動物，初步進行形態(tài)學大體觀察。之后均以石蠟制作成切片行HE、Masson染色進行觀察，并在界面區(qū)行成纖維細胞計數(shù)及對腱-骨愈合情況做

3、半定量Buark評分。
　　【結果】
　　1.形態(tài)學大體形態(tài)
　　三組新西蘭兔分別在術后2周、4周、8周、12周各處死4只并取膝關節(jié)觀察，膝關節(jié)周圍無發(fā)熱、紅腫，切口無感染、無裂開跡象，打開關節(jié)腔見滑膜明顯增生，半月板完好，未見明顯磨損及破裂，移植肌腱張力良好，固定牢固，2周時移植腱與股骨、脛骨隧道間仍可見間隙，4周時可見部分瘢痕組織填充于骨隧道內口，8周時骨隧道內口可見大量瘢痕組織填充，外口見部分骨樣組織生長，12周

4、時骨樣組織生長較8周明顯增多，移植肌腱與骨隧道壁緊密粘連。
　　2.HE、Masson染色
　　①A組：術后2周腱-骨愈合界面區(qū)見少量成纖維細胞增生及無序排列的膠原纖維；術后4周界面區(qū)可見軟骨組織形成，部分成纖維細胞和類軟骨細胞參與其中，界面部分粘連；術后8周界面區(qū)組織連接較前緊密,已有軟骨移行帶出現(xiàn)，類軟骨細胞排列規(guī)整，Sharpey纖維初步形成；術后12周界面區(qū)見到規(guī)整的Sharpey纖維，有致密結締組織及鈣化軟骨形成，

5、部分區(qū)域組織有直接愈合傾向。②B、C組：術后2周移植肌腱與骨隧道間可見少量成纖維細胞增生，界面區(qū)間隙明顯；術后4周界面區(qū)可見炎性細胞和成纖維細胞,結合較疏松，且有明顯的孔隙，無腱-骨連接；術后8周腱-骨界面區(qū)結合較疏松，但好于4周時,未見明顯Sharpey纖維生成；術后12周界面區(qū)少量Sharpey纖維排列紊亂，見鈣化軟骨形成，腱-骨組織之間連接相對緊密，組織未見直接愈合傾向。
　　3．成纖維細胞計算
　　分別于2、4、8、

6、12周四個時間點對三組HE染色切片采用IPP（Image－ProPlus）顯微鏡圖像分析軟件進行成纖維細胞計數(shù)，并行單向方差分析及 SNK法檢驗，結果表明：A組分別與 B組、 C組在各個時間點比較，A組成纖維細胞數(shù)量均高于B、C組，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而 B組與 C組在各時間點比較，差異均無統(tǒng)計學意義。
　　4.組織形態(tài)學Buark半定量分級
　　分別于2、4、8、12周四個時間點對三組HE染色切片觀察，依據(jù)