ACL重建后TGF-β1-VEGF165共表達(dá)基因轉(zhuǎn)染的BMSCs促進(jìn)腱-骨愈合的研究.pdf

1、目的：探討ACL重建術(shù)后以BMSCs為載體的TGF-β1/VEGF165共表達(dá)基因治療是否可有效提高腱-骨隧道的新骨生成，促進(jìn)腱-骨愈合，從而增強(qiáng)其生物力學(xué)強(qiáng)度。
　　方法：采用骨髓穿刺法獲取兔骨髓，并用密度梯度離心法成功分離并體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。將40只新西蘭大白兔按照BMSCs是否接受TGF-β1/VEGF165共表達(dá)基因腺病毒分為兩組，每組20只，每只兔行雙側(cè)前交叉韌帶重建手術(shù)，用自體半腱肌腱為韌帶移植物，在完成前交叉

2、韌帶重建手術(shù)后，實(shí)驗(yàn)組將經(jīng)腺病毒轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)TGF-β1/VEGF165的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和生物蛋白膠混合后注入兔前交叉韌帶重建模型的肌腱和骨隧道間隙內(nèi)，對照組將混有骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物蛋白膠注入肌腱和骨隧道間隙內(nèi)。分別在6、12周時(shí)間點(diǎn)各組處死10只兔，其中4只兔取材后進(jìn)行HE染色和天狼星紅染色的組織學(xué)檢查，6只兔進(jìn)行生物力學(xué)檢查，軟件計(jì)算出最大載荷和剛度，記載失效點(diǎn)是股骨骨隧道附著部、脛骨骨隧道附著部或中間韌帶，并于12周每組各取

3、4只兔麻醉后進(jìn)行影像學(xué)CT觀察，觀察骨隧道大小的改變和骨隧道密度改變。
　　結(jié)果：組織學(xué)檢查結(jié)果中，術(shù)后6周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本的腱-骨界面之間結(jié)合較密集，可見成纖維細(xì)胞和類軟骨細(xì)胞，細(xì)胞排列不規(guī)整，一定量的新生血管，局部形成軟骨組織移行帶，已有Sharpey樣纖維生成，而此時(shí)對照組標(biāo)本的腱-骨界面之間可見成纖維細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞和炎性細(xì)胞，組織間血管含量較少，無明顯腱-骨連接；術(shù)后12周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本腱-骨界面之間結(jié)合緊密，軟骨組織移

4、行帶逐漸形成，可見成熟軟骨細(xì)胞，排列整齊，膠原纖維大量合成，可見新生血管和成骨細(xì)胞，腱-骨界面局部出現(xiàn)肌腱-纖維軟骨-鈣化軟骨-骨組織的移行帶，類似于正常前交叉韌帶的止點(diǎn)結(jié)構(gòu)，而此時(shí)對照組標(biāo)本腱-骨界面可見成纖維細(xì)胞增生，Sharpey纖維增多，排列較整齊，局部腱-骨界面出現(xiàn)膠原纖維連接。生物力學(xué)測試，在術(shù)后6周時(shí)實(shí)驗(yàn)組和對照組肌腱移植物均從骨隧道中拔出，但實(shí)驗(yàn)組拔出力量較對照組增大；術(shù)后12周時(shí)，對照組有2例肌腱移植物從骨隧道中拔出，

5、其余肌腱移植物均為中部斷裂；通過t檢驗(yàn)對術(shù)后第6周和第12周的實(shí)驗(yàn)組與對照組結(jié)果進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)組肌腱移植物的最大載荷和剛度較對照組明顯增強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。影像學(xué)CT觀察術(shù)后12周可見實(shí)驗(yàn)組與對照組骨隧道均無明顯擴(kuò)大，骨隧道及其邊緣骨密度實(shí)驗(yàn)組較對照組明顯增高。
　　結(jié)論：以BMSCs為載體的TGF-β1/VEGF165共表達(dá)基因治療可以促進(jìn)重建ACL移植物早期的血管生成和腱-骨隧道的新骨生成，從而使腱-骨愈合