脂聯(lián)素基因單核苷酸多態(tài)性與2型糖尿病及胰島素抵抗的相關(guān)性.pdf

1、目的：本研究旨在了解河北省滄州市地區(qū)2型糖尿?。╰ype2 diabetes mellitus,T2DM）人群的脂聯(lián)素（adiponectin APN）基因外顯子2第45位點（rs2241766）和內(nèi)含子2第276位點（rs1501299）單核苷酸多態(tài)性（single-nucleotide polymorphism,SNP）的分布情況，并探討這兩個位點的單核苷酸多態(tài)性與T2DM及胰島素抵抗的關(guān)系，進一步在T2DM的發(fā)病機制方面提供一定理

2、論依據(jù)，以期在 T2DM的治療方面提供有價值的基因?qū)W指導(dǎo)。
　　方法：
　　1.研究對象的選擇：所有受試者均來源于河北省滄州市地區(qū)（本土著居民或祖籍三代均為滄州市人），均為漢族，均為中老年人群，男女比例相當(dāng)。采用世界衛(wèi)生組織（WHO，1999年）糖尿病診斷標準，從2015年10月至2016年10月在河北省滄州市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科住院的中老年患者中隨機篩選出100例符合條件的T2DM患者，作為實驗組。同時從我院體檢中心選取年齡性

3、別匹配的65例無糖尿病的健康受試者，作為對照組。
　　2.提取 DNA：用康為的血液基因組非柱式提取試劑盒提取外周血DNA。
　　3.SNP分型檢測：應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)～限制性片段長度多態(tài)性分析(restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)檢測脂聯(lián)素基因SNP+45、SNP+276。利用Premier5及Oligo7軟件設(shè)計引物，將待測的靶DNA片段進行聚合酶鏈式反應(yīng)(p

4、olymerase chain reaction,PCR)擴增復(fù)制，2％瓊脂糖凝膠電泳圖譜鑒定目的條帶，切膠回收純化目的條帶，然后利用DNA限制性內(nèi)切酶SmaI、EcoRI分別在不同體系中進行限制性酶切反應(yīng)，最后經(jīng)2.5%凝膠電泳分析酶切后的DNA產(chǎn)物，并判斷基因型。另外隨機選取部分樣品的PCR純化產(chǎn)物送到公司（北京三博遠志）進行測序，以確定SNP+45位點和SNP+276位點的基因型，同時對酶切結(jié)果進行驗證，以保證實驗結(jié)果的可靠性。<

5、br>　　4.血漿APN水平的測定：用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定。
　　結(jié)果：
　　1.對照組與實驗組的臨床及生化指標比較
　　兩組間性別、年齡、身高相比，無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。與對照組相比，實驗組體重、體重指數(shù)（body mass index BMI）、腰圍、臀圍、腰臀比(waist to hip ratio WHR)、收縮壓（systolic blood pressure SBP）、舒張壓（diast

6、olic blood pressure DBP）、空腹血糖（fasting blood sugar FBG）、甘油三酯（triglycerides TG）、膽固醇（total cholesterol TC）、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein cholesterol LDL-C）、胰島素及胰島素抵抗指數(shù)（Homeostasis model assessment of insulin resistance HOM

7、A-IR）各值均明顯增高， P值均<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；實驗組高密度脂蛋白（high-density lipoprotein cholesterol HDL-C）和 APN各值均下降，P值均<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.血漿脂聯(lián)素水平
　　2.1.實驗組的血漿APN水平明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.2.所有樣本的APN與臨床及生化指標進行偏相關(guān)分析。
　　以血漿脂聯(lián)

8、素水平為因變量，排除其它影響分析的混雜因素后，以各項生化指標為自變量，分別對其單獨進行兩兩偏相關(guān)分析。發(fā)現(xiàn)血漿APN與腰圍、SBP、TG、TC、LDL-C、HOMA-IR成負相關(guān)。其中與腰圍、LDL-C的關(guān)聯(lián)性最強，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P值<0.05）。
　　3.實驗組和對照組間基因型和等位基因頻率分布的比較
　　3.1.SNP+276位點：
　　實驗組各基因型的頻率分別為 TT13％、GT37％、GG50％；對照組

9、分別為TT10.77％、GT20%、GG69.23％，實驗組GG基因型頻率明顯低于對照組，TT基因型頻率明顯高于對照組，兩組間相比差異有顯著性(P<0.05)。
　　實驗組T和G等位基因頻率分別是31.5％和68.5％，對照組T、G等位基因頻率分別為20.77％和79.23％，兩組間相比差異顯著(P<0.05)。3.2 SNP+45位點：
　　實驗組各基因型的頻率分別為TT53％、TG36％、GG11％；對照組分別為 TT3

10、5.38％、TG46.15％、GG18.47％，兩組間比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。
　　實驗組T、G等位基因頻率分別為71％和29％，對照組T、G等位基因頻率分別為58.46％和41.54％，兩組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。4脂聯(lián)素基因SNP+276、SNP+45間胰島素抵抗相關(guān)因素及血漿APN水平比較：
　　4.1.SNP+276位點：
　　脂聯(lián)素基因SNP+276各基因型間指標(BMI、FBG、TG、

11、TC、HDL-C、LDL-C、HOMA-IR、胰島素)及APN差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其P值<0.05。其中以 TC、FBG、胰島素、HOMA-IR這些指標間的差異最具顯著性（P<0.05）。采用LSD-t檢驗進行各基因型間指標的兩兩比較，可知GG型的TC高于TT型，GG型的HOMA-IR高于非GG型,TT型的胰島素、FBG高于GG型(P<0.05)。
　　4.2.SNP+45位點：
　　脂聯(lián)素基因SNP+45各基因型間指標(BM

12、I、FBG、TG、TC、HDL-C、LDL-C、APN、HOME-IR及胰島素)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，其P值<0.05。其中以 APN、FBG、胰島素差異性最顯著（P<0.05）。采用 LSD-t檢驗進行各基因型間指標的兩兩比較，發(fā)現(xiàn)TT型的FBG、胰島素高于非TT型，GG型的APN高于非GG型（P<0.05）。
　　5.多因素Logistic回歸分型
　　以所有樣本各項生化及臨床指標為自變量，2型糖尿病為因變量，進行多因素的

13、Logistic回歸分析，得出：TC是2型糖尿病的危險因素（P<0.05，OR>1），而HDL-C是2型糖尿病的保護因素（P<0.05，OR<1）， SNP+276基因型TT為2型糖尿病的獨立危險因素（P<0.05，OR>1）。
　　結(jié)論：
　　1.河北漢族人群之間存在脂聯(lián)素+276與+45位點基因型和等位基因頻率多態(tài)性。
　　2.2型糖尿病組較健康對照組患者的血漿脂聯(lián)素水平明顯降低。血漿APN與腰圍、SBP、TG、T