支持細(xì)胞對(duì)體外培養(yǎng)精原干細(xì)胞的作用途徑研究.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)不同培養(yǎng)條件對(duì)精原干細(xì)胞(Spermatogonial Stem Cells,SSCs)進(jìn)行體外培養(yǎng),觀(guān)察每種培養(yǎng)條件下SSCs24h貼壁率,增殖特性并繪制其增殖曲線(xiàn),比較上述指標(biāo)在不同培養(yǎng)條件下的差異,從而探討支持細(xì)胞對(duì)體外培養(yǎng)精原干細(xì)胞的作用途徑。
　　 方法：
　　 選用7d齡雄性昆明種小鼠,兩步酶消化法獲得睪丸組織細(xì)胞懸液,差異時(shí)間貼壁法分離精原干細(xì)胞和支持細(xì)胞,免疫熒光法和油紅O染色法

2、分別對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)鑒定,流式細(xì)胞儀對(duì)精原干細(xì)胞進(jìn)行純度分析。按培養(yǎng)條件的不同將實(shí)驗(yàn)分為3組:精原干細(xì)胞與支持細(xì)胞共培養(yǎng)組(A組),條件培養(yǎng)基組(B組),常規(guī)培養(yǎng)基組(C組)。其中B組所用條件培養(yǎng)基按單純支持細(xì)胞培養(yǎng)上清液:雙倍濃縮的DMEM/F12:胎牛血清=4.5:4.5:1的比例配置;A、C組所用常規(guī)培養(yǎng)基即含體積分?jǐn)?shù)10％胎牛血清的DMEM/F12。臺(tái)盼蘭法測(cè)定各組貼壁率,四甲基偶氮唑鹽(MTT)法測(cè)定各組精原干細(xì)胞的吸光度并繪制

3、增值曲線(xiàn)。倒置顯微鏡下觀(guān)察各組精原干細(xì)胞增殖特點(diǎn)及集落形成情況。比較各組精原干細(xì)胞24h貼壁率、增值曲線(xiàn)及存活時(shí)間。
　　 結(jié)果：
　　 A組精原干細(xì)胞的24h貼壁率大于B組及C組(P＜0.05),而B(niǎo)、C組間無(wú)差異(P＞0.05);A組精原干細(xì)胞接種起即穩(wěn)定增殖,于(7-10d)形成穩(wěn)定集落并維持約30d的特性。B組和C組均表現(xiàn)為精原干細(xì)胞經(jīng)短暫的增殖后呈現(xiàn)快速減少的趨勢(shì),培養(yǎng)一周后,精原干細(xì)胞數(shù)量明顯減少。