NRG-1基因轉染內(nèi)皮祖細胞條件培養(yǎng)液對心肌細胞的影響的實驗研究.pdf

1、學位論文獨創(chuàng)性聲明學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南昌大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作c掏：刪撕卜陽／日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解南昌大學有關保留、使用學

2、位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權南昌大學可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同時授權中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到《中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡向社會公眾提供信息服務。(保密的學位論文在解密后適用本授權書)學位論文作者簽名(手寫)：智P移彳簽字日期：盈‘，，／年易月，／日簽川Fh雌沙

3、導瓤日字簽摘要lUlIIIIFIIIIIIIIIIIIlY1958047摘要目的：神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1在抗心肌細胞凋亡、促進心肌細胞增殖上以及心衰的發(fā)生發(fā)展發(fā)揮重要作用。由骨髓間充質(zhì)干細胞誘導分化的內(nèi)皮祖細胞在血管內(nèi)皮修復和新生血管形成發(fā)揮重要作用，并且在心臟重構上發(fā)揮潛在的作用。本研究重點探討神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1(NRG1)基因轉染內(nèi)皮祖細胞(EPCs)后的條件培養(yǎng)液以及未轉染rl：1NRG1的EPCs條件培養(yǎng)液對心肌細胞凋亡、增殖及相關細胞因子

4、的影響。方法：(1)分離擴增培養(yǎng)及鑒定大鼠EPCs，應用PCR技術體外合成NRG一1對應的基因組片段，定向克隆到pGCFUGFP慢病毒載體，構建大鼠NRG1真核表達載體。將pGCFUGFPrhNRG1慢病毒載體轉染入第二代的EPCs。分別于轉染后第2、4、6天后，應用熒光顯微鏡下觀察轉染效率，并于轉染后第6天應用RTPCR及WesternBlot法檢測NRG1的mRNA及蛋白的表達。(2)分離培養(yǎng)及鑒定大鼠心肌細胞，用TNFalpha建

5、立心肌細胞凋亡模型。實驗分為實驗A和實驗B兩部分。實驗A：1、檢測NRG1基因轉染EPCs后的條件培養(yǎng)液以及未轉染NRG1的EPCs條件培養(yǎng)液對心肌細胞凋亡的影響。實驗分三組，空白組：乳鼠心肌細胞TNFa(50ng／m1)；對照組：乳鼠心肌細胞TNFa(50ng／m1)EPCS培養(yǎng)液上清；實驗組：乳鼠心肌細胞TNFa(50ng／m1)轉染NRG1后的EPCs培養(yǎng)液上清。24h后Hoechest33342。PI雙染色法及AnnexinFI

6、FC／PI流式細胞法檢測各組心肌細胞凋亡率。2、檢測NRG1基因轉染EPCs后的條件培組，空白組：乳鼠心肌細胞。對照組：乳鼠心肌細胞EPCs培養(yǎng)養(yǎng)液以及未轉染NRG1的EPCs條件培養(yǎng)液對心肌細胞增殖的影響。實驗分三液上清。實驗組：乳鼠心肌細胞轉染NRG1后的EPCs培養(yǎng)液上清。24h后應用MTT法檢測各組心肌細胞增殖率。實驗B：檢測NRG1基因轉染EPCs后的條件培養(yǎng)液以及未轉染NRG1的EPCS條件培養(yǎng)液對心肌細胞細胞因子的影響。實