丹參酮ⅡA在壓力超負荷大鼠心室重構(gòu)中的作用及對HO-1表達的影響.pdf

1、目的:
　　1.觀察壓力超負荷大鼠心肌中羥脯氨酸(HYP)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)等相關(guān)指標，并探討丹參酮IIA(TanIIA)對其影響。
　　2.觀察TanIIA對血紅素加氧酶-1(HO-1)蛋白表達水平和HO-1mRNA基因表達的影響，檢測氧化應(yīng)激產(chǎn)物超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活力以及丙二醛(MDA)含量，探究氧化應(yīng)激與心室重構(gòu)的關(guān)系以及T

2、anIIA的抗氧化作用。
　　方法:
　　1.6周齡雄性、健康的SD大鼠共40只，按隨機編號擇出8只作為假手術(shù)組(Sham組)，剩下的32只行腹主動脈縮窄術(shù)制備壓力超負荷模型，4周后，將造模存活的22只大鼠再次隨機分為3組，即模型組(Model組，n=7)、丹參酮IIA組(TanIIA組，n=7)及丹參酮IIA＋HO-1抑制劑鋅原卟啉組(TanIIA＋ZnPP組，n=8)。Sham組未出現(xiàn)大鼠死亡。Sham組和Model組均

3、以生理鹽水(NS)(4ml/kg·d，腹腔注射);TanIIA組以丹參酮IIA磺酸鈉注射劑(STS)(20mg/kg·d，腹腔注射);TanIIA＋ ZnPP組以(STS20mg/Kg· d＋ZnPP注射劑1mg/kg·d，腹腔注射)，持續(xù)給藥4周。
　　2.手術(shù)8周末將實驗動物處死，摘取其心臟并及時準確稱取體質(zhì)量(BW)、心臟質(zhì)量(HW)以及左心室質(zhì)量(LVW)，算出心臟質(zhì)量指數(shù)(HWI=HW/BW)、左心室質(zhì)量指數(shù)(LVWI=

4、LVW/BW)，來判斷心室肥厚的程度;HE染色和Masson染色可在光學(xué)顯微鏡下觀測其心肌形態(tài)學(xué)上的改變;堿水法檢測心肌中HYP含量;免疫組織化學(xué)法分析心肌中α-SMA的表達程度;蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blotting)檢測心肌中TGF-β1、HO-1的蛋白含量;Real time-PCR(RT-PCR)方法測定HO-1mRNA基因表達情況;檢測血漿中SOD、GSH-Px活力和MDA的含量。
　　結(jié)果:
　　1.

5、各組大鼠HWI和LVWI的比較
　　Model組大鼠HWI和LVWI值分別為(3.80±0.18)mg/Kg、(3.40±0.16) mg/Kg，較Sham組[HWI(2.98±0.15)mg/Kg、LVWI(2.56±0.12)mg/Kg]明顯增高(P＜0.01);TanIIA組HWI和LVWI分別為(3.27±0.18)mg/Kg、(2.91±0.21)mg/Kg; TanIIA＋ZnPP組HWI和LVWI分別為(3.49±0

6、.16)mg/Kg、(3.12±0.20)mg/Kg，兩組較Model組均有所下降(P＜0.01或P＜0.05)，而TanIIA組的下降更為明顯。
　　2.各組大鼠心肌組織中HE染色和Masson染色結(jié)果的比較
　　HE染色結(jié)果，Sham組光鏡下壞死灶不明顯，心肌間質(zhì)及微血管顯示正常，細胞布列齊整，且胞質(zhì)染色均勻;與Sham組對比，Model組的心肌纖維變粗且布列雜亂，可以見到心肌斷裂和細胞核固縮深染，周圍有較多的膠原纖維包

7、繞，間質(zhì)有炎癥細胞浸潤;而TanIIA組和TanIIA＋ZnPP組與Model組相較有不同程度的改善，TanIIA改善更加明顯;Masson染色結(jié)果顯示，心肌細胞染呈紅色而膠原纖維呈藍色，結(jié)果顯示與Sham組對比，Model組的膠原沉積現(xiàn)象明顯加重;而TanIIA組和TanIIA＋ZnPP組與Model組相較均有不同程度減輕，TanIIA減輕更加明顯。
　　3.各組大鼠心肌中HYP含量的比較
　　與Sham組相比，Model

8、組大鼠心肌中HYP的含量明顯增加(P＜0.01);與Model組相比，TanIIA組和TanIIA＋ZnPP組HYP含量降低(P＜0.01或P＜0.05)，TanIIA組降低更為明顯。
　　4.各組大鼠心肌中α-SMA表達水平的比較
　　與Sham組相比，Model組大鼠心肌中α-SMA的免疫組化陽性表達水平增長明顯(P＜0.01);與Model組相比，TanIIA組和TanIIA＋ZnPP組中α-SMA的陽性表達水平降低(

9、P＜0.01或P＜0.05)，TanIIA組下降更為顯著。
　　5.各組大鼠心肌中TGF-β1蛋白表達水平的比較
　　Model組大鼠心肌中TGF-β1的蛋白表達程度與Sham組相比增長明顯(P＜0.01);與Model組相比，TanII組和TanIIA＋ZnPP組中TGF-β1的蛋白表達水平均降低(P＜0.01或P＜0.05)，而TanIIA組下降更為顯著。
　　6.各組大鼠心肌中HO-1蛋白表達水平的比較
　

10、　與Sham組相比，Model組大鼠心肌中HO-1的蛋白表達水平升高(P＜0.01);在四組中，TanIIA組的蛋白表達水平最高(與Model組相比P＜0.05)，當加用了HO-1抑制劑ZnPP后，HO-1的蛋白表達水平較TanIIA組有所下降(P＜0.01)。
　　7.各組大鼠心肌中HO-1mRNA基因表達的比較
　　與Sham相比，Model組大鼠心肌中HO-1mRNA基因表達水平升高(P＜0.01);在四組中，TanI

11、IA組的HO-1mRNA基因表達水平最高(與Model組相比P＜0.05)，當加用了HO-1抑制劑ZnPP后，HO-1mRNA的基因表達水平較TanIIA組有所下降(P＜0.01)。
　　8.各組大鼠血漿中SOD、GSH-Px活力和MDA含量的比較
　　與Sham組相比，Model組大鼠血漿中抗氧化酶SOD、GSH-Px的活力降低，而氧化產(chǎn)物MDA的含量則升高(P＜0.01);與Model組相比，TanIIA組和TanIIA