RP105抑制TLR4信號通路對大鼠心肌缺血再灌注凋亡損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：探討RP105心肌過表達對TLR4信號通路介導的心肌缺血再灌注凋亡損傷的保護作用，并探討其分子機制。
　　方法：將40只SPF級雄性SD大鼠(220-250g)隨機分為4組(n=10)：生理鹽水+假手術組(Sham組)、生理鹽水+缺血再灌注組(I/R組)、Ad-EGFP+缺血再灌注組(Ad-E組)、Ad-EGFP-RP105+缺血再灌注組(Ad-E-R組)。采用多點注射法，將重組腺病毒載體或生理鹽水在體轉染大鼠心肌，轉染后3

2、天構建心肌缺血再灌注損傷模型。缺血30min再灌注4h后空氣栓塞法處死大鼠，采用免疫熒光及Real-time PCR法檢測轉染基因EGFP、RP105表達；Evans blue+TTC雙染法檢測大鼠心肌梗死面積；TUNEL法檢測大鼠心肌凋亡指數；Western blot檢測線粒體相關的凋亡級聯(lián)反應Bax、cytochrome c、Bcl-2、caspase-9、cleaved caspase-3表達情況以及RP105、TLR4、P38M

3、APK、p-P38MAPK、c-Jun/AP-1、p-c-Jun/AP-1蛋白表達。
　　結果：(1)重組腺病毒載體Ad-EGFP、Ad-EGFP-RP105轉染心肌組織3天后，轉染基因EGFP與RP105在心肌成功過表達。(2)與Sham組相比，I/R組、Ad-E組、Ad-E-R組心梗面積、心肌凋亡指數均顯著增加(p<0.05)；線粒體依賴性凋亡級聯(lián)反應中促凋亡分子Bax、Cyt-c、caspase-9、cleaved casp

4、ase-3表達均明顯增加(p<0.05)，而抗凋亡分子Bcl-2表達明顯降低(p<0.05)；TLR4信號通路中TLR4、P38MAPK、p-P38MAPK、c-Jun/AP-1、p-c-Jun/AP-1蛋白表達水平均顯著增加(p<0.05)。(3)與I/R組、Ad-E組相比， Ad-E-R組心梗面積、心肌凋亡指數顯著降低(p<0.05)；線粒體依賴性凋亡級聯(lián)反應中促凋亡分子表達明顯降低，而抗凋亡分子表達顯著升高；TLR信號通路中TLR

5、4、p-P38MAPK、p-c-Jun/AP-1蛋白表達均明顯降低(p<0.05)。(4) I/R組、Ad-E組兩組間心梗面積、心肌凋亡指數、線粒體依賴性凋亡級聯(lián)反應中促凋亡分子、抗凋亡分子表達水平以及TLR4信號通路中TLR4、P38MAPK、p-P38MAPK、c-Jun/AP-1、p-c-Jun/AP-1蛋白表達水平均無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。(5) I/R組、Ad-E組、Ad-E-R組三組間P38MAPK及c-Jun/AP-

6、1蛋白表達無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。此外，p-P38/P38MAPK、p-c-Jun/c-Jun相對表達率比值結果表明：與Sham組比較，I/R組、Ad-E組、Ad-E-R組比值明顯升高(p<0.05);與I/R組、Ad-E組相比，Ad-E-R組比值顯著降低(p<0.05)；I/R組、Ad-E組比值升高程度無顯著性差異(p>0.05)。
　　結論：(1) Ad-EGFP及Ad-EGFP-RP105重組腺病毒成功轉染心肌組織，可

7、顯著提高轉染基因EGFP、RP105mRNA與蛋白表達；(2) RP105心肌過表達可顯著降低缺血再灌注心肌損傷，降低再灌注心肌細胞凋亡；(3)心肌缺血再灌注中TLR4信號通路激活，促進下游信號分子P38MAPK及轉錄因子c-Jun/AP-1磷酸化活化，從而參與缺血再灌注心肌細胞的凋亡損傷過程；(4) RP105心肌過表達可抑制線粒體依賴性的凋亡級聯(lián)反應，降低缺血再灌注誘導的心肌細胞凋亡；(5) RP105可能通過抑制TLR4/P38M