TLR-4-NF-κB信號通路在小鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用.pdf

1、目的:
　　 本實(shí)驗(yàn)通過建立兩種類型的小鼠心肌缺血再灌注損傷的動物模型，比較TLR-4突變小鼠（C3H/Hej小鼠）和野生型小鼠（C57BL/6小鼠）在心肌缺血再灌注損傷之后，心肌缺血及梗死面積，心肌組織中丙二醛、超氧化物歧化酶、髓過氧化物酶活性，檢測血清中部分細(xì)胞因子，免疫組化法觀察缺血心肌的NF-κB表達(dá)情況以及測定缺血心肌組織中TLR-4蛋白表達(dá)水平，來探討TLR-4/NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在心肌缺血再灌注損傷中的作用。<

2、br>　　 方法:
　　 雄性TLR-4突變小鼠（C3H/Hej小鼠）和野生型小鼠（C57BL/6小鼠）各40只，每一類小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham)以及缺血再灌注手術(shù)組(IR)，假手術(shù)組左冠狀動脈前降支僅穿線不結(jié)扎，缺血再灌注手術(shù)組結(jié)扎左冠狀動脈前降支制備心肌缺血再灌注動物模型（結(jié)扎30min，再灌注120min）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，迅速摘取心肌，用TTC染色法測定心肌缺血及梗死面積，取心肌標(biāo)本行HE染色觀察形態(tài)學(xué)改變，測定心肌

3、組織丙二醛(MDA)、髓過氧化物酶(MPO)以及超氧化物歧化酶(SOD)活性，ELISA法檢測血清TNF-α、IL-1、IL-6、MCP-1的濃度，免疫組織化學(xué)染色法檢測心肌組織NF-κB的表達(dá)，WesternBlotting法測定缺
　　 血心肌組織中TLR-4蛋白的表達(dá)水平。對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以P＜0.05定義為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4、>　　 結(jié)果:
　　 1.心電圖變化兩組IR的小鼠心電圖ST段在缺血30min上升達(dá)到高峰，再灌注120min后逐漸回落至缺血前水平。
　　 2.心肌缺血及梗死面積測定兩類小鼠的Sham組均無明顯心肌缺血，C3H/Hej的IR組小鼠心肌缺血及梗死面積較C57BL/6的IR組有所減輕(P＜0.05)。
　　 3.心肌MDA、MPO及SOD活性心肌MDA含量在缺血再灌注后呈現(xiàn)上升趨勢，SOD含量呈現(xiàn)下降趨勢，C3H

5、/Hej的IR組心肌MDA比C57BL/6的IR組上升程度低(P＜0.05)、SOD下降趨勢也較后者幅度?。≒＜0.05），MPO在心肌缺血再灌注后上升，且C3H/Hej的IR組上升程度弱于C57BL/6的IR組(P＜0.05)。
　　 4.血清中TNF-α、IL-1、IL-6、MCP-1濃度測定心肌缺血再灌注后血清中TNF-α、IL-1、IL-6、MCP-1呈現(xiàn)上升趨勢，C3H/Hej組及C57BL/6組的IR組與Sham組比

6、較均呈現(xiàn)上升趨勢，差異顯著（P均＜0.05），且在C3H/Hej的IR組上升不及C57BL/6的IR組(P＜0.05)。
　　 5.免疫組織化學(xué)染色法檢測心肌組織NF-κB的表達(dá)C3H/Hej的IR組表達(dá)弱于C57BL/6的IR組。
　　 6.檢測缺血心肌組織中TLR-4表達(dá)在心肌缺血后表達(dá)較心肌缺血前都有明顯升高，在C57BL/6小鼠中尤為明顯，上述差別都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。C3H/Hej小鼠正常心肌中TLR