利用光譜技術(shù)研究溶菌酶與殼聚糖的相互作用.pdf

1、殼聚糖分子具有特殊的結(jié)構(gòu)與功能，在蛋白質(zhì)的分離、純化等方面具有重要的應(yīng)用。溶菌酶來(lái)源廣泛，是一種無(wú)毒、無(wú)害、具有一定的保健功能的蛋白酶。本論文將殼聚糖用于溶菌酶的固定化載體，利用光譜技術(shù)研究了溶菌酶與殼聚糖的相互作用，為殼聚糖分子作為酶蛋白分離載體的進(jìn)一步應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 本文用熒光猝滅理論研究了溶菌酶與殼聚糖在溶液體系中的相互作用，通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)溶菌酶內(nèi)源熒光猝滅機(jī)制為動(dòng)態(tài)猝滅和靜態(tài)猝滅同時(shí)發(fā)生的復(fù)合猝滅，并計(jì)算了體系

2、的結(jié)合常數(shù)和熱力學(xué)函數(shù)（焓變、熵變、吉布斯自由能），由此推演出殼聚糖和溶菌酶之間存在很強(qiáng)的結(jié)合作用，殼聚糖與溶菌酶結(jié)合反應(yīng)過(guò)程中的作用力主要是疏水作用力和靜電引力。計(jì)算了兩者之間的結(jié)合距離為1.47nm。同時(shí)，進(jìn)一步研究了溶菌酶與殼聚糖微球作用前后的結(jié)構(gòu)變化，通過(guò)化學(xué)交聯(lián)法制備了殼聚糖微球，然后在pH5.6磷酸鹽(PBS)緩沖體系中吸附溶菌酶分子，再用pH7.4磷酸鹽(PBS)緩沖液將溶菌酶解析下來(lái)，用熒光光譜法、紫外-可見(jiàn)光譜法、紅外