鵝細(xì)小病毒與鴨圓環(huán)病毒共感染誘發(fā)鴨大舌-短喙綜合征.pdf

1、自2015年3月份以來(lái)，山東、江蘇、安徽、河南等地區(qū)的商品肉鴨中發(fā)生了以雛鴨的生長(zhǎng)發(fā)育緩慢，上下鴨喙萎縮，舌頭腫脹，僵硬及向外伸出彎曲綜合病癥，該病的致死率較低，發(fā)病率可達(dá)15％-45%，采食量嚴(yán)重下降，感染后期在抓捕時(shí)腿部及翅膀的骨骼容易造成骨折，給養(yǎng)殖戶(hù)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失，該病被命名為“鴨大舌-短喙綜合征”。
　　2015年12月，山東菏澤、肥城地區(qū)某養(yǎng)殖規(guī)模各大約為6500只鴨場(chǎng)鴨群中出現(xiàn)類(lèi)似鴨大舌-短喙綜合征癥狀，我們對(duì)送

2、檢病例進(jìn)行了研究。本研究通過(guò)自然發(fā)病鴨的流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、病理組織學(xué)檢查、細(xì)菌培養(yǎng)、血涂片觀察、血清生化指標(biāo)檢測(cè)、PCR檢測(cè)、病毒分離增殖、病毒純化、電鏡負(fù)染、透射超薄切片觀察、高通量測(cè)序和人工致病試驗(yàn)等方面進(jìn)行研究。通過(guò)送檢自然感染鴨的剖檢觀察肝臟邊緣有灶狀壞死，肺臟充血、腫脹鴨舌向外伸出，僵硬。血涂片觀察發(fā)現(xiàn)血液中出現(xiàn)大量異嗜性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞；病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)鴨舌、喙、肝臟以出現(xiàn)以淋巴細(xì)胞為主的炎性浸潤(rùn)，肝臟、心肌及胰腺發(fā)

3、生壞死，肺臟和腎臟出血，其他組織出現(xiàn)不同病理變化；通過(guò)PCR檢測(cè)鴨病毒性肝炎病毒、鴨坦布蘇病毒、鴨呼腸孤病毒均呈陰性，鵝細(xì)小病毒（GPV）和鴨圓環(huán)病毒（DuCV）均呈雙陽(yáng)性；血清生化指標(biāo)檢測(cè)分析谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、總膽紅素、直接膽紅素、總蛋白等生化指標(biāo)于健康鴨比較差異顯著或差異極顯著；細(xì)菌學(xué)檢測(cè)結(jié)果為陰性；通過(guò)PCR方法對(duì)GPV和DuCV的自然感染鴨的流行調(diào)查分析，發(fā)現(xiàn)自然感染鴨中GPV和DuCV的共感染比例高達(dá)40%。通過(guò)對(duì)病料

4、的無(wú)菌分離，取病鴨的肝、舌組織，經(jīng)尿囊腔按0.2ml接種量接種9d鴨胚后，15d收集鴨胚尿囊液。通過(guò)鴨胚胚胎的剖檢觀察到感染組鴨胚胚胎的胸肌、皮下及心臟彌漫性出血，肝臟壞死，對(duì)照組正常；病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)感染組的心肌細(xì)胞出現(xiàn)局部性或彌漫性出血，心肌細(xì)胞輕微空泡變性，肝臟的中央靜脈周?chē)霈F(xiàn)彌漫性嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)；正常對(duì)照組的肝臟和心臟未出現(xiàn)病變。通過(guò)PCR檢測(cè)鴨胚尿囊液GPV和DuCV均呈雙陽(yáng)性。通過(guò)對(duì)鴨胚尿囊液中病毒經(jīng)蔗糖梯度超速離心，

5、純化病毒。純化后病毒經(jīng)電鏡負(fù)染觀察到有的病毒粒子呈直徑為20-22nm或14-20.5nm，六角形、球形或二十面體，無(wú)囊膜的完整病毒粒子。將純化后病毒提取DNA，經(jīng)全基因擴(kuò)增，通過(guò)高通量測(cè)序證實(shí)病毒粒子為DuCV。通過(guò)核苷酸序列分析結(jié)果表明，該GPV毒株與與中國(guó)GPV型QH15毒株的親緣關(guān)系最近，其同源性為99.8%，與其他毒株的同源性大部分在93.5%~99.8%。利用高通量測(cè)序手段獲得DuCV的全基因，并命名為SDFC12毒株（Ge

6、nBank:KY328304.1），DuCV的毒株的SDFC12株與中國(guó)DU103株的親緣關(guān)系最近，其同源性為99.3%，與其他毒株的同源性在29.2%~99.3%。對(duì)感染鴨胚胚胎的肝臟透射電鏡觀察結(jié)果顯示,肝臟內(nèi)有大量的六角形或球形，直徑為14-22nm的無(wú)囊膜完整病毒粒子存在。通過(guò)人工接種回歸動(dòng)物試驗(yàn)，剖檢觀察感染組的鴨舌略長(zhǎng)且彎曲，肝臟壞死，胸腺出血，脾臟、法氏囊及胸腺比對(duì)照組重量減輕，免疫器官指數(shù)明顯下降。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的病理組織學(xué)觀

7、察及血涂片觀察與臨床自然感染鴨基本一致。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血清生化指標(biāo)檢測(cè)分析試驗(yàn)組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、堿性磷酸酶、總膽紅素總蛋白等生化指標(biāo)與對(duì)照組相比差異顯著或差異極顯著。通過(guò)PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的GPV和DuCV均呈雙陽(yáng)性。
　　通過(guò)本研究結(jié)果表明，鴨大舌-短喙綜合征與GPV和DuCV共感染相關(guān)，經(jīng)電鏡負(fù)染觀察到鵝細(xì)小病毒和鴨圓環(huán)病毒的病毒形態(tài)。經(jīng)病理組織學(xué)檢測(cè)、血清生化指標(biāo)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)鴨大舌-短喙綜合征引起鴨的肝臟的膽管上皮腫脹、