病原弧菌與白斑綜合征病毒共感染對養(yǎng)殖對蝦生長與存活的影響.pdf

1、多年來，細菌性和病毒性疾病的發(fā)生和流行，給世界范圍內的水產養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經濟損失。凡納濱對蝦因其耐高溫、鹽度適宜范圍廣，且適宜高密度養(yǎng)殖等特點在世界范圍內大規(guī)模的養(yǎng)殖，但是隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，許多病害頻繁的出現。白斑綜合征病毒(white spot syndrome virus，WSSV)是感染養(yǎng)殖對蝦的一種重要的病毒性病原，副溶血弧菌的感染對對蝦養(yǎng)殖的危害也日益嚴重，病毒與細菌的交叉或疊加感染引起的對蝦死亡可能更加嚴重。

2、　　本論文研究包括三部分:(1)人工培育對蝦苗種體內可培養(yǎng)細菌的數量及組成分析;(2)副溶血弧菌和WSSV共感染對凡納濱對蝦的成活率的影響;(3)兩株毒力不同的副溶血弧菌和WSSV共感染對凡納濱對蝦存活率的影響。
　　1.人工培育對蝦苗種體內可培養(yǎng)細菌的數量及組成分析:為調查研究不同養(yǎng)殖場攜帶WSSV、IHHNV病毒與不攜帶上述2種病毒的對蝦苗種體內可培養(yǎng)細菌數量和組成，本章應用常規(guī)細菌分離、培養(yǎng)與純化，細菌16SrDNA序列分析

3、等方法調查分析了山東、天津、浙江部分苗種場凡納濱對蝦（Litopenaeusvannamei）和中國明對蝦（Fenneorpenaeus chinensis）苗種體內的可培養(yǎng)細菌總數以及優(yōu)勢菌的種類和數量，并用PCR的方法檢測對蝦攜帶病毒情況。結果顯示，凡納濱對蝦和中國明對蝦苗種體內的可培養(yǎng)細菌總數均在105～107CFU/g之間，分離出的細菌分屬于弧菌屬（Vibrio）、發(fā)光桿菌屬（Photobacterium）、芽孢桿菌屬(Baci

4、llus)、鹽單胞菌屬（Halomonas）等8個屬，弧菌屬（Vibrio）在對蝦苗種體內占絕對優(yōu)勢，達43.80％～90.23％。凡納濱對蝦和中國明對蝦菌種部分樣品檢測為WSSV和IHHNV陽性，WSSV檢出率為33.33％，IHHNV檢出率為22.22％，同時攜帶兩種病毒的檢出率為11.11％。只攜帶WSSV病毒以及同時攜帶兩種病毒的對蝦苗種體內的總菌數在1.23×107～4.14×107 CFU/g之間，顯著高于其他批次的樣品(P

5、＜0.05)，且弧菌數量在107 CFU/g左右，顯著高于其他批次的樣品（P＜0.05）。只攜帶IHHNV以及不攜帶病毒的對蝦苗種體內的弧菌數量為104～106 CFU/g。研究表明，弧菌屬在凡納濱對蝦和中國明對蝦菌種體內普遍存在且為優(yōu)勢菌屬，并且攜帶WSSV可能會引起對蝦苗種體內的弧菌數量增長。
　　2.副溶血弧菌和WSSV共感染對凡納濱對蝦的成活率的影響:本章通過投喂的方法使凡納濱對蝦感染白斑病，注射的方法使毒力較強的副溶血弧

6、菌在凡納濱對蝦體內潛伏感染，并分為先投喂WSSV病料后注射副溶血弧菌，先注射副溶血弧菌后投喂WSSV病料兩種情況進行實驗。并統計各組凡納濱對蝦的累積死亡率，用TCBS平板涂布的方法檢測凡納濱對蝦血淋巴中的弧菌數量，用絕對熒光定量PCR的方法檢測凡納濱對蝦鰓部的WSSV的拷貝數，以及Real-TimePCR方法檢測凡納濱對蝦鰓部的相關功能基因LvMyD88、LvTube和Lvakt的表達量。先投喂WSSV病料后注射副溶血弧菌組從開始投喂W

7、SSV病料到實驗第10d死亡率達到100％，而先投喂WSSV病料后注射PBS組從開始投喂WSSV病料到實驗第13d死亡率達到100％。先注射副溶血弧菌，后投喂WSSV病料組在從開始投喂WSSV病料到實驗的第11d時凡納濱對蝦的累積死亡率達到100％，只感染WSSV組在實驗的第13d累積死亡率達到100％。只注射副溶血弧菌組，弧菌會在凡納濱對蝦的血淋巴中逐漸減少，而其它組的弧菌數量都顯著的增加(P＜0.05)。先投喂WSSV病料后注射副溶

8、血弧菌組、先注射副溶血弧菌后投喂WSSV和只投喂WSSV組在投喂WSSV病料后的WSSV拷貝數分別在72h、96h和144h時由105copies mg-1 tissue迅速升高到107 copies mg-1 tissue。本研究的結果提示:副溶血弧菌的感染能夠加快WSSV在對蝦體內的增殖，WSSV同時也能促進副溶血弧菌的繁殖，副溶血弧菌的快速繁殖結合WSSV的大量增殖導致對蝦的大量死亡。
　　3.兩株毒力不同的副溶血弧菌和WS

9、SV共感染對凡納濱對蝦存活率的影響:本章通過注射的方法用WSSV和兩株毒力不同的副溶血弧菌感染凡納濱對蝦。并分為先注射WSSV粗提液后注射副溶血弧菌，先注射副溶血弧菌后注射WSSV粗提液兩種情況進行試驗。WSSV為主要病原，兩株毒力不同的副溶血弧菌用較少的劑量在對蝦體內潛在感染。并統計各組凡納濱對蝦的累積死亡率，用TCBS平板涂布的方法檢測凡納濱對蝦血淋巴和肝胰腺中的弧菌數量，用絕對熒光定量PCR的方法檢測凡納濱對蝦鰓部的WSSV的拷貝