中國(guó)馬傳染性貧血病毒驢白細(xì)胞疫苗致弱過程中不同代次毒株LTR序列分析.pdf

1、馬傳染性貧血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)是反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬成員之一,在基因組結(jié)構(gòu)和抗原性上與人艾滋病病毒(HIV)十分相似,可以引起馬屬動(dòng)物的一種急性烈性傳染病,以貧血、持續(xù)感染、反復(fù)發(fā)熱為特征,是馬屬動(dòng)物最重要的傳染病之一.中國(guó)的馬傳貧驢白細(xì)胞弱毒疫苗是迄今為止唯一大規(guī)模應(yīng)用的慢病毒疫苗.馬傳貧弱毒疫苗致弱路線是:將一株來源于馬體的EIAV超強(qiáng)毒力毒株LN經(jīng)過驢體連續(xù)傳代100余代

2、使病毒毒力增強(qiáng)后獲得了驢強(qiáng)毒株DV(對(duì)馬和驢均100﹪致死),然后將DV株連續(xù)通過驢白細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)馴化,使得病毒毒力完全喪失,而保持了良好的免疫原性,最終培育成功EIAV驢白細(xì)胞弱毒疫苗DLA(沈榮顯等,1979),DLA進(jìn)一步通過驢胎皮膚細(xì)胞培養(yǎng)馴化,獲得了皮膚細(xì)胞弱毒疫苗株FD.該試驗(yàn)利用中國(guó)擁有的馬傳染性貧血病毒疫苗培育系統(tǒng)(由強(qiáng)毒到弱毒的不同代次病毒),將保留的不同代次病毒體外接種健康驢白細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行復(fù)壯,待感染驢白細(xì)胞出

3、現(xiàn)CPE后,一定時(shí)間內(nèi)收獲病毒,提取其前病毒DNA,以套式PCR方法分別擴(kuò)增不同代次病毒非編碼區(qū)5LTR和3LTR基因片斷,以雙脫氧法測(cè)定不同代次病毒的核苷酸序列.結(jié)合EIAV致弱過程中病毒生物學(xué)特性的變化,并參照已測(cè)定的馬傳貧病毒毒株的序列及已構(gòu)建的幾個(gè)不同毒力和細(xì)胞嗜性的感染性分子克隆序列,發(fā)現(xiàn)在EIAV疫苗致弱過程中幾處與病毒毒力變化相關(guān)的基因變異位點(diǎn),即在強(qiáng)弱毒中E-box基序表現(xiàn)出一定的差異,且R區(qū)TAR結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄起始?jí)A基及P