WAS蛋白缺陷對記憶B細(xì)胞和濾泡輔助T細(xì)胞功能的影響和機(jī)制研究.pdf

1、本文分析了WAS蛋白缺陷對記憶B細(xì)胞和濾泡輔助T細(xì)胞功能的影響。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：WAS蛋白缺陷對生發(fā)中心B細(xì)胞和記憶B細(xì)胞功能的影響及機(jī)制研究。
　　目的：免疫記憶是機(jī)體適應(yīng)性免疫應(yīng)答的核心。免疫記憶的缺失或失調(diào)可引起多種免疫性疾病。免疫系統(tǒng)單基因遺傳病稱為原發(fā)性免疫缺陷?。≒ID），PID對研究人類免疫系統(tǒng)運(yùn)行規(guī)律意義重大。WAS綜合征是一種罕見的X-連鎖隱性遺傳PID，WAS突變導(dǎo)致WAS患者產(chǎn)生特異

2、性抗體功能缺陷。本研究以 WAS患者和 WASKO小鼠為模型，討論 WASP影響 MBCs形成及其維持，免疫記憶應(yīng)答，GCB和MBCs活化及分化的分子機(jī)制。
　　方法：我們通過流式細(xì)胞術(shù)檢測 WAS患者或健康對照外周血B細(xì)胞各亞群的百分比和數(shù)量。T細(xì)胞依賴性抗原免疫后WASKO和 WT小鼠脾臟中B細(xì)胞各亞群的百分比和數(shù)量。并檢測GCB及MBC的增殖和凋亡。我們使用 WASKO/WT骨髓嵌合體小鼠模型以驗(yàn)證WASp缺陷時(shí)特異性免疫缺

3、陷是否固有存在。
　　結(jié)果：WAS患兒血漿中分泌抗原特異性免疫球蛋白的量明顯較同齡健康兒童減少。WASKO小鼠抗原特異性GCB細(xì)胞、漿母細(xì)胞及記憶B細(xì)胞數(shù)量較WT小鼠明顯減少，抗原特異性漿細(xì)胞占漿細(xì)胞比例較WT小鼠也明顯下降；WASKO小鼠GCB細(xì)胞及記憶B細(xì)胞增殖功能受損。
　　結(jié)論：WASp作為肌動蛋白骨架蛋白調(diào)節(jié)因子參與GCB和MBCs的生成和分化，WASp缺陷時(shí) T細(xì)胞依賴性免疫反應(yīng)尤其是GCB向MBC轉(zhuǎn)化途徑存在缺

4、陷。
　　第二部分：WAS蛋白缺陷對濾泡輔助 T細(xì)胞功能的影響和機(jī)制研究。
　　目的：WAS是血液系統(tǒng)的特異性調(diào)節(jié)肌動蛋白，WAS病人以濕疹、血小板減少伴免疫缺陷為主要特征。本研究以WAS患者及WASKO小鼠為模型，以明確WASp缺陷對濾泡輔助T細(xì)胞（Follicular helper T-cell, Tfh）細(xì)胞數(shù)量及功能的影響，并明確缺陷Tfh細(xì)胞對免疫記憶功能的影響。
　　方法：通過流式細(xì)胞數(shù)檢測 WAS患者或健

5、康對照外周血及WASKO和 WT小鼠脾臟中 Tfh細(xì)胞的頻率和數(shù)量。我們使用WASKO/WT骨髓嵌合體小鼠模型以驗(yàn)證WASp缺陷時(shí)Tfh缺陷是否固有存在。我們把WASKO或 WT小鼠的初始CD4 T細(xì)胞分別過繼性移植給 CD4KO小鼠，同時(shí)在體外把 WAS患者和健康對照者及WASKO及WT小鼠的Tfh細(xì)胞和初始B細(xì)胞共培養(yǎng)，ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中IgG分泌情況，以驗(yàn)證缺陷Tfh對免疫記憶功能的影響。
　　結(jié)果：WAS患者外周血

6、Tfh細(xì)胞增殖降低，凋亡增加，其頻率和數(shù)量相較于健康對照明顯減少。WAS患者Tfh細(xì)胞中ICOS的表達(dá)增加，BCL6表達(dá)減少。這一結(jié)果在 WASKO小鼠中得到復(fù)制。但在骨髓嵌合體小鼠中，WASKO組骨髓嵌合小鼠相較于 WT組小鼠表現(xiàn)出Tfh細(xì)胞及BCL6表達(dá)明顯降低，但是ICOS表達(dá)也降低。體內(nèi)Tfh功能試驗(yàn)所得WASKO組移植小鼠體內(nèi)T細(xì)胞依賴性記憶B細(xì)胞及生發(fā)中心B細(xì)胞生成明顯降低。體外Tfh功能實(shí)驗(yàn)WAS組細(xì)胞培養(yǎng)液分泌IgG明顯