肝缺血再灌注后HMGB-1 mRNA和蛋白的表達(dá)及其與細(xì)胞凋亡關(guān)系的研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)臨床肝臟手術(shù)中不同時(shí)期患者肝組織中HMGB-1的含量、HMGB-1 mRNA的表達(dá)及細(xì)胞凋亡的情況，探討HMGB-1在臨床肝臟手術(shù)中肝缺血再灌注損傷的作用及其與細(xì)胞凋亡的關(guān)系。為臨床選用有效的預(yù)處理方法，從而抑制細(xì)胞凋亡、減輕肝臟缺血再灌注損傷(hepatic ischemic reperfusion injury，HIRI)提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1.標(biāo)本采集：2007年3月～2009年

2、3月在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院肝膽外科住院，行肝段切除的肝細(xì)胞癌患者36例，患者術(shù)前均未行灌注化療及栓塞治療，術(shù)中均采用Pringle's法阻斷肝門(mén)。在肝切手術(shù)中，分別在肝門(mén)阻斷前、肝門(mén)阻斷開(kāi)放時(shí)、手術(shù)結(jié)束關(guān)腹前切取肝組織10g。分為兩份，一份用4％多聚甲醛固定，制作石蠟標(biāo)本。另一份置于-70℃冰箱中保存，用于提取總RNA。所取標(biāo)本均經(jīng)患者本人同意及醫(yī)院倫理委員會(huì)審查同意。
　　 2.逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)HM

3、GB-1mRNA表達(dá)。
　　 3.脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記技術(shù)(Terminaldeoynucleotidle transferase mediated d-UTP nick end labeling，TUNEL)法測(cè)定肝組織中肝細(xì)胞凋亡。
　　 4.免疫組織化學(xué)法(S-P法)測(cè)定肝組織中HMGB-1蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.肝組織中HMGB-1mRNA的表達(dá)，在肝門(mén)阻斷前為

4、0.5554±0.0843，肝門(mén)開(kāi)放時(shí)為1.0703±0.1931，關(guān)腹前為1.4028±0.2150。這三個(gè)組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。肝門(mén)阻斷前HMGB-1mRNA的表達(dá)比肝門(mén)開(kāi)放時(shí)少，關(guān)腹前HMGB-1mRNA的表達(dá)要比肝門(mén)開(kāi)放時(shí)增加。
　　 2.肝細(xì)胞凋亡，在肝門(mén)阻斷前的凋亡指數(shù)(Apoptotic Index，AI)為2.89±0.274％，肝門(mén)開(kāi)放時(shí)為2.26±0.337％，關(guān)腹前為1.51±0.523％

5、。肝細(xì)胞凋亡指數(shù)在這三個(gè)組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。肝門(mén)阻斷前的肝細(xì)胞凋亡指數(shù)高于肝門(mén)開(kāi)放時(shí)和關(guān)腹前；而肝門(mén)開(kāi)放時(shí)肝細(xì)胞凋亡指數(shù)高于關(guān)腹前。
　　 3.HMGB-1蛋白的表達(dá)用免疫組化染片的分值表示。在肝門(mén)阻斷前為2.97±0.576，肝門(mén)開(kāi)放時(shí)為6.51±1.354，關(guān)腹前為10.42±0.985，這三個(gè)組間變化的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。肝組織中HMGB-1蛋白的表達(dá)在關(guān)腹前比肝門(mén)開(kāi)放時(shí)顯著增加，在肝門(mén)開(kāi)

6、放時(shí)比肝門(mén)阻斷前增加。
　　 4.相關(guān)性分析：
　　 ①肝門(mén)阻斷前肝組織中HMGB-1mRNA的表達(dá)與肝組織HMGB-1蛋白的相關(guān)系數(shù)γ=0.905，(p＜0.05)；呈正相關(guān)。
　　 ②肝門(mén)阻斷前肝組織HMGB-1 mRNA的表達(dá)與肝細(xì)胞凋亡的相關(guān)系數(shù)γ=-0.831，(p＜0.05)；呈負(fù)相關(guān)。
　　 ③肝門(mén)開(kāi)放時(shí)肝組織HMGB-1 mRNA的表達(dá)與肝組織HMGB-1蛋白的相關(guān)系數(shù)γ=0.927，(p

7、＜0.05)；呈高度正相關(guān)。
　　 ④肝門(mén)開(kāi)放時(shí)肝組織HMGB-1 mRNA的表達(dá)與肝細(xì)胞凋亡的相關(guān)系數(shù)γ=-0.878，(p＜0.05)；呈負(fù)相關(guān)。
　　 ⑤關(guān)腹前肝組織中HMGB-1 mRNA的表達(dá)與肝組織HMGB-1蛋白的相關(guān)系數(shù)γ=0.940，(p＜0.05)；呈正相關(guān)。
　　 ⑥關(guān)腹前肝組織HMGB-1 mRNA的表達(dá)與肝細(xì)胞凋亡的相關(guān)系數(shù)γ=-0.932，(p＜0.05)；呈負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)