急性感染時中性粒細胞功能與活性的變化及其他外科臨床研究.pdf

1、研究背景：
　　 外科急性感染是一個非常復雜的機制,既存在細菌對機體組織的損傷,又有細胞的壞死及炎癥細胞的趨化侵潤。在急性炎癥反應中,中性粒細胞是免疫應答第一道防線,起著關鍵的作用。
　　 中性粒細胞是具有遷移、變形、粘附和吞噬功能?，F(xiàn)今大多數(shù)學者認為,中性粒細胞具有很強的趨化作用,而對中性粒細胞起趨化作用的物質(zhì),稱之為中性粒細胞的趨化因子。由于中性粒細胞細胞膜上有趨化因子受體,通過受體與趨化因子結合,激活膜上的鈣泵,細

2、胞向前方伸出片足,最終細胞向產(chǎn)生趨化因子部位遷移。當中性粒細胞與外源性異物接觸后,將異物包圍,形成含有異物的吞噬體或吞噬泡。中性粒細胞膜表面有IgG Fc受體和補體C3受體,可加速吞噬作用。被吞噬的異物裹有抗體和補體時,與中性粒細胞膜上的相應受體結合,而加強了細胞對它的吞噬作用,稱為調(diào)理作用。同時,中性粒細胞本身細胞膜因為吞噬作用而紊亂,引起呼吸爆發(fā),細胞耗氧量增加,產(chǎn)生大量的過氧化物及超氧化物等細胞毒性效應分子,在殺死吞噬的細菌等異物

3、后,本身也死亡,成為膿細胞。中性粒細胞受到趨化因子作用遷移至病灶,并通過吞噬、調(diào)理作用及呼吸爆發(fā)等殺滅病原體及微生物,即為中性粒細胞在感染過程中發(fā)揮的最主要作用。其中,中性粒細胞趨化因子在啟動免疫防御機制中至關重要。
　　 中性粒細胞死亡模式直接關系著炎癥反應以及患者的預后:
　　 1)中性粒細胞不能及時清除壞死細胞會導致膿腫和周圍組織損壞,并吸引更多的中性粒細胞；而提高中性粒細胞凋亡率,可明顯緩解這一現(xiàn)象。
　　

4、 2)巨噬細胞的吞噬是清除死亡中性粒細胞是一個重要的途徑,其清除的快慢與粒細胞凋亡的程度呈正相關。
　　 3)中性粒細胞是急性炎癥反應的先鋒軍。在外科急性感染中,中性粒細胞是主要的效應細胞,其死亡模式,會影響感染恢復快慢以及預后。
　　 目的：
　　 本研究通過實驗室對中性粒細胞與壞死細胞關系的初步研究,以取得一些比較重要的資料,其后通過急性闌尾炎的臨床研究,得出相類似的數(shù)據(jù),同時為此類外科急性感染患者的抗感染

5、治療選擇、手術時機、手術方式及預后提供決策依據(jù)。
　　 方法：
　　 實驗室分離液分離中性粒細胞及PBMC,通過56℃水煮法制作PBMC細胞壞死,并通過CFSE標記以及CD15染色中性粒細胞,再用transwell證明壞死細胞對中性粒細胞的趨化性。
　　 CFSE染色壞死細胞與新鮮中性粒細胞共同培養(yǎng)1-24小時,通過流式細胞儀及凋亡壞死檢測試劑盒觀察中性粒細胞吞噬壞死細胞情況及吞噬后死亡情況。
　　 通過

6、比較10例正常志愿者與10例20-40歲急性闌尾炎患者在感染期及恢復期中性粒細胞的吞噬功能與活性情況,證明中性粒細胞在感染中的地位與作用。
　　 結果：
　　 通過流式細胞儀,初步證明壞死細胞趨化中性粒細胞。
　　 中性粒細胞吞噬壞死細胞后會死亡,其死亡方式受時間及吞噬效果影響
　　 對于急性闌尾炎的研究,由于其他細胞可能干擾實驗的準確性,分離液分離的中性粒細胞純度較低,僅有80％:而使用磁珠分選的中性粒

7、細胞的純度可達94.5％。在中性粒細胞分離中使用了磁珠分離,更好的保證了實驗的準確性。
　　 急性闌尾炎患者在感染期,中性粒細胞存活時間明顯長于恢復期及健康志愿者,在體外培養(yǎng)72小時候,急性闌尾炎恢復期患者及健康志愿者的中性粒細胞已經(jīng)有70％左右發(fā)生死亡,而感染組僅有6.5％發(fā)生死亡。這可能與感染期中性粒細胞多為骨髓新生細胞有關。進一步分析了各組細胞在功能上的關系,發(fā)現(xiàn)感染組中性粒細胞的吞噬速度較恢復期組及健康志愿者組快在2小時

8、就達到了吞噬高峰而其他兩組在4小時才達到了吞噬高峰。在吞噬強度上各組也存在區(qū)別,感染組有9.27％的中性粒細胞發(fā)生了吞噬,而其他組中性粒細胞的吞噬率僅為6％左右。
　　 各組中性粒細胞吞噬珠子以后,死亡方式也各不相同。感染組中性粒細胞吞噬珠子后細胞多發(fā)生凋亡,而恢復期組及健康組多發(fā)生壞死。以4小時為例,檢測各組細胞凋亡率發(fā)現(xiàn):感染期組吞噬珠子的細胞凋亡率為81.45％,而恢復期及健康組凋亡率為30.34％,壞死率達到了63.5％

9、。
　　 結論：
　　 1、壞死細胞對中性粒細胞有趨化作用
　　 2、中性粒細胞的死亡模式受壞死細胞影響,若壞死細胞數(shù)量過多,難以被中性粒細胞完全吞噬清除,則中性粒細胞以壞死為主。隨著時間的進展及對壞死細胞的清除,中性粒細胞最終壞死與凋亡趨于穩(wěn)定,并以細胞凋亡為主。
　　 3、急性闌尾炎,是外科急診中的常見疾病之一,而中性粒細胞在急性闌尾炎診斷和治療中扮演了重要角色。通過分析急性闌尾炎中性粒細胞不同時期細