胰島素對(duì)煙霧吸入性損傷大鼠肺組織抗凋亡作用.pdf

1、目的：吸入性損傷后其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，使其成為燒傷主要死亡原因之一，其病理生理學(xué)機(jī)制與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)以煙霧吸入性損傷大鼠為模型，給予大鼠皮下注射胰島素，同時(shí)以吸入性損傷組大鼠為對(duì)照，在相同部位注射等容量生理鹽水。分別在不同的時(shí)相點(diǎn)測(cè)量大鼠肺組織中的凋亡指數(shù)(apoptosisindex AI)、調(diào)控細(xì)胞凋亡的蛋白質(zhì)如Bax和Bcl-2的表達(dá)變化，以及肺組織病理形態(tài)的改變，來(lái)探討胰島素對(duì)早期肺組織細(xì)胞凋亡的影響及對(duì)肺組織的保護(hù)作用。

2、
　　 方法：將成年清潔級(jí)SD大鼠66只，體重(200±20)g，隨機(jī)分為3組，正常對(duì)照組6只、吸入性損傷組(損傷+生理鹽水)和胰島素治療組(損傷+胰島素)各30只，其中吸入性損傷組和胰島素治療組又隨機(jī)分為2h、6h、12h、24h、48h、五個(gè)組。胰島素治療組是煙霧吸入致傷后于皮下注射胰島素5U/kg，吸入性損傷組煙霧吸入致傷后于相同部位注射等體積的生理鹽水，正常對(duì)照組不做致傷處理，并在2h、6h、12h、24h、48h監(jiān)測(cè)血

3、糖值。光鏡進(jìn)行肺組織切片病理形態(tài)學(xué)觀察。采用原位末端標(biāo)記法(Terminal-deoxynucleoitidyl Transferase Mediated NickEnd Labeling TUNEL)檢測(cè)大鼠肺組織的AI，免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)抗凋亡蛋白Bcl-2及Bax的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：⑴大鼠煙霧吸入性損傷后一般情況觀察：各組間動(dòng)物比較體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大鼠在經(jīng)過(guò)特殊裝置煙霧吸入性損傷時(shí)出現(xiàn)呼吸急促，肺部聽(tīng)診濕羅音，

4、心率加快，取出放入室內(nèi)空曠區(qū)休息30分鐘后上述表現(xiàn)逐漸減輕，而正常對(duì)照組在靜息狀態(tài)下呼吸平穩(wěn)，無(wú)氣促及呼吸困難等癥狀。⑵各組大鼠血糖水平變化：吸入性損傷組大鼠血糖2h略微升高，胰島素治療組血糖降低，與吸入性損傷組比較差異明顯(P<0.05)，胰島素治療組6h血糖值與正常對(duì)照組比較降低(P<0.05)。與吸入性損傷組比較(P<0.01)。12h胰島素治療組血糖回升到正常，3組血糖組間比較(P>0.05)。⑶大鼠肺組織肉眼及光學(xué)顯微鏡觀察肺

5、病理變化：正常對(duì)照組各時(shí)段大鼠肺組織粉紅色，表面光滑、紅潤(rùn)，無(wú)出血斑及出血點(diǎn)，無(wú)充血水腫；吸入性損傷組大鼠12h及24h肺組織呈暗紅色，體積增大膨脹，肺表面濕潤(rùn)，滲出較多，可見(jiàn)彌漫性充血水腫，部分肺組織有淤血表現(xiàn)；胰島素治療組大鼠12h及24 h肺組織與吸入性損傷組比較充血水腫減輕，肺組織淤血較少。吸入性損傷組大鼠48h肺組織暗紅色較前兩時(shí)段減輕，可見(jiàn)出血斑、出血點(diǎn)，胰島素治療組大鼠48h肺組織與吸入性損傷組比較水腫減輕。⑷各組大鼠在不

6、同的時(shí)相點(diǎn)肺組織細(xì)胞凋亡變化以及Bax、Bcl-2和Bcl-2/Bax值表達(dá)的改變。UNEL染色結(jié)果顯示凋亡指數(shù)在：胰島素治療組和吸入性損傷組與正常對(duì)照組比較(P<0.01)，胰島素治療組和吸入性損傷組在傷后2 h(P>0.05)，6h后各時(shí)相點(diǎn)，胰島素治療組與吸入性損傷組相比，凋亡細(xì)胞明顯減少，且各時(shí)相點(diǎn)均較正常組明顯升高，24小時(shí)各值達(dá)高峰(P<0.01)。免疫組化結(jié)果顯示：Bcl-2和Bax在胰島素治療組和吸入性損傷組與正常對(duì)照組

7、比較，各個(gè)組間差異均(P<0.01)。Bcl-2在吸入性損傷組和胰島素治療組2h升高，并24h以后維持在較高水平，2h、6h胰島素治療組與吸入性損傷組比較差異不明顯(P>0.05)，6h后各組間比較差異顯著(P<0.01)。Bax在2h胰島素治療組和吸入性損傷組無(wú)差別(P>0.05)，2h后各組間比較差異均具有顯著性(P<0.01)。吸入性損傷后早期給予胰島素可以直接促進(jìn)Bcl-2轉(zhuǎn)錄，抑制Bax等促凋亡基因的表達(dá)，引起B(yǎng)cl-2表達(dá)的