飽和氫氣生理鹽水對(duì)吸入性肺損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:探討不同劑量氫氣飽和生理鹽水(hydrogen-rich saline，HS)對(duì)煙霧吸入性損傷大鼠急性肺損傷(acute lung injury, ALI)的保護(hù)作用。
　　方法:將30只成年清潔級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組:空白對(duì)照組(C)、吸入性損傷組(I)、氫氣飽和生理鹽水組(HS)其中包括:氫氣飽和生理鹽水低劑量組(2.5 ml/kg，HSL)、氫氣飽和生理鹽水中劑量組(5 ml/kg，HSM)、氫氣飽和生理鹽水高劑量

2、組(10 ml/kg，HSH)。空白對(duì)照組不做任何處理，吸入性損傷組造成吸入性損傷模型后不做處理，氫氣飽和生理鹽水組造成吸入性損傷模型后給予腹腔注射富氫水治療(3組的注射劑量分別為2.5 ml/kg、5 ml/kg、10ml/kg)。各組于致傷后24h后腹主動(dòng)脈取血2ml，處死。動(dòng)脈血離心后檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα，TNF-α);取右肺組織做成病理切片，光鏡及透射電鏡下觀察肺組織病理學(xué)變化。

3、取左肺組織勻漿檢測(cè)組織中丙二醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性;免疫組織化學(xué)法測(cè)定肺組織核因子-κBp65（nuclear factor-κB，NF-κ Bp65）的表達(dá);TUNEL法檢測(cè)肺組織凋亡情況。
　　結(jié)果:①光鏡下:空白組大鼠肺泡腔結(jié)構(gòu)完整，壁光滑，肺泡隔均勻一致，未見水腫，肺泡腔清晰，其內(nèi)無(wú)滲出液或滲出的白細(xì)胞;吸入性損傷組表現(xiàn)為肺泡間隔

4、明顯增厚、水腫，肺泡間質(zhì)小血管充血，管腔內(nèi)中性粒細(xì)胞積聚、微血栓形成。肺泡擴(kuò)張或萎陷，肺泡組織結(jié)構(gòu)難以辨清，肺泡腔內(nèi)和小氣道內(nèi)有大量紅細(xì)胞及炎性細(xì)胞浸潤(rùn);中、高劑量氫氣生理鹽水組肺組織水腫減輕，浸潤(rùn)的白細(xì)胞數(shù)量減少，肺泡擴(kuò)張和萎陷程度有所改善，而低劑量組改善不明顯。②電鏡下:空白對(duì)照組肺泡清亮，血管暢通，Ⅰ型上皮細(xì)胞(alveolartypeⅠ cells，AT-Ⅰ)正常，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞((alveolartypeⅡ cells，AT

5、-Ⅱ)結(jié)構(gòu)正常，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)帶狀，附著核糖體豐富，胞質(zhì)內(nèi)板層小體堆積，肺泡表面活性物質(zhì)(pulmonary surfactant，PS)小泡豐富。毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞基本正常。呼吸膜結(jié)構(gòu)正常;吸入性損傷組肺泡腔內(nèi)有紅細(xì)胞、細(xì)胞碎片，肺泡毛細(xì)血管充血。肺泡上皮細(xì)胞微絨毛脫落，有的上皮細(xì)胞壞死、脫落。呼吸膜腫脹增厚。血管皺曲，紅細(xì)胞瘀滯，粘附于血管內(nèi)壁。有大量髓鱗體樣結(jié)構(gòu)產(chǎn)生。Ⅰ型上皮細(xì)胞核周池?cái)U(kuò)張，核染色質(zhì)電子密度減低，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)池?cái)U(kuò)張，伴有脫

6、顆粒，線粒體結(jié)構(gòu)部清晰。Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散，細(xì)胞表面有少量微絨毛或無(wú)微絨毛，有的可見微絨毛的脫落，胞漿內(nèi)板層小體結(jié)構(gòu)較少，線粒體基質(zhì)深、模糊、嵴不清楚，少數(shù)線粒體有空泡變，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，所含表面活性物質(zhì)大部分排出。部分毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，凸向血管腔;HSL組較I組變化不大;HSM、HSH組電鏡下病理改變較I組明顯減輕，且HSH組較HSM組效果明顯。③血清TNF-α含量對(duì)比:HSM、 HSH組TNF-α含量較I組降低(P＜0.0

7、5)，且HSH組TNF-α較HSM組降低明顯(P＜0.05)，HSL組與I組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。④肺組織SOD、MDA活性對(duì)比:HSM、 HSH組SOD含量高于I組(P＜0.05)，且HSH組高于HSM組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，HSL組與I組差異不明顯(P＞0.05)。HSM、 HSH組MDA水平低于I組(P＜0.05)，且HSH組低于HSM組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，HSL組與I組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

8、（P＞0.05）。⑤肺組織細(xì)胞NF-κB表達(dá)程度的對(duì)比:空白對(duì)照組大鼠肺組織內(nèi)存在散在的NF-κB陽(yáng)性染色細(xì)胞，主要位于胞漿（對(duì)照組NF-κBp65不表達(dá)或表達(dá)極弱）。吸入性損傷組有深染的NF-κB陽(yáng)性細(xì)胞，其染色以細(xì)胞核為主。而氫氣飽和生理鹽水各組細(xì)胞核及胞漿NF-κB染色普遍淡于I組，以HSM、 HSH為著，HSL變化不大。各組平均光密度值(MOD)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示與上述表述一致，且HSH組MOD值低于HSM組(P＜0.05)。⑥肺組織

9、凋亡情況對(duì)比:TUNEL染色結(jié)果顯示，空白組有少許細(xì)胞被染成棕色，吸入性損傷組可見大量被染成棕色的陽(yáng)性細(xì)胞，然而HSM、 HSH組陽(yáng)性細(xì)胞較吸入性損傷組明顯減少，HSL組變化不明顯。各組凋亡指數(shù)(AI)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示與上述表述一致，HSH組低于HSM組(P＜0.05)
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)中、高劑量氫氣飽和生理鹽水(5 ml/kg、10 ml/kg)通過(guò)影響細(xì)胞炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激及凋亡方面減輕吸入性損傷大鼠的急性肺損傷，且高劑量組(10