骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)肝大部切除大鼠肝再生的研究.pdf

1、目的：(1)探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSCs)標(biāo)記和示蹤方法，優(yōu)化示蹤技術(shù)；(2)觀察不同途徑移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在肝大部切除大鼠剩余肝內(nèi)定植及促進(jìn)肝再生的作用。
　　 方法：(1)體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞儀鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原(CD29、CD34、CD45、CD90)，分別用BrdU、DAPI以及GFP3種方法標(biāo)記干細(xì)胞，BrdU標(biāo)記率通過(guò)細(xì)胞免疫化學(xué)鑒定，D

2、API和GFP標(biāo)記率直接通過(guò)熒光顯微鏡進(jìn)行鑒定，對(duì)比觀察三種示蹤技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)。(2)建立肝大部切除(約70％)大鼠模型，分別經(jīng)尾靜脈和門(mén)靜脈向肝切除大鼠移植DAPI標(biāo)記的第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞約1.5×106，單純肝大部切除組作對(duì)照組，分別于術(shù)后3天、9天采血檢測(cè)肝功能，9天后處死大鼠，取肝臟標(biāo)本，免疫組織化學(xué)方法觀察肝內(nèi)Ki-67的表達(dá)及BrdU陽(yáng)性細(xì)胞，并通過(guò)熒光顯微鏡觀察兩種移植途徑對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝臟遷移的影響。

3、　　 結(jié)果：(1)流式細(xì)胞儀鑒定結(jié)果顯示骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞CD29、CD90表達(dá)陽(yáng)性，CD34、CD45表達(dá)呈陰性。3種標(biāo)記方法對(duì)細(xì)胞均未顯示明顯毒性。終濃度為10μmol/L及標(biāo)記48h、終濃度為1μg/ml及標(biāo)記12h時(shí)分別為BrdU和DAPI的最佳標(biāo)記濃度及時(shí)間。感染復(fù)數(shù)MOI=8時(shí)，GFP慢病毒感染MSCs12h，感染率可達(dá)90％以上；(2)尾靜脈移植組和門(mén)靜脈移植組9天后肝功能顯示ALB升高，且其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.0

4、5);尾靜脈移植組和門(mén)靜脈移植組肝組織Ki-67表達(dá)(103.30±40.44，95.82±26.67vs60.29±35.71個(gè)細(xì)胞/400倍視野)及BrdU陽(yáng)性細(xì)胞(15.92±3.06，16.01±3.32vs11.63±3.74個(gè)細(xì)胞/400倍視野)升高，與對(duì)照組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05)；DAPI標(biāo)記陽(yáng)性的細(xì)胞在門(mén)靜脈移植組(18.1±3.4個(gè)細(xì)胞/100倍視野)多于尾靜脈移植組(7.6±2.0個(gè)細(xì)胞/100倍