鈍頂螺旋藻兩個(gè)生態(tài)種多糖的抗菌-抗腫瘤活性及其機(jī)理的研究.pdf

1、本論文以鄂爾多斯高原堿湖鈍項(xiàng)螺旋藻和非洲Chad湖鈍頂螺旋藻為材料，分離、提取、純化和鑒定了其多糖，并對(duì)多糖的抗菌、抗腫瘤活性及其作用機(jī)理進(jìn)行了比較研究，以期為鄂爾多斯高原堿湖鈍頂螺旋藻及其多糖產(chǎn)品的開發(fā)、新的抗腫瘤藥物的篩選和尋找天然的抗生素替代品及動(dòng)物免疫增強(qiáng)劑奠定理論和應(yīng)用研究基礎(chǔ)。論文研究?jī)?nèi)容分四部分：
　　 (1)采用傳統(tǒng)的水提醇沉法、三氯乙酸除蛋白法和活性炭脫色法提取并初步純化了鈍頂螺旋藻兩個(gè)生態(tài)種多糖，Sephad

2、exG-100凝膠柱層析法進(jìn)一步分離純化得到了鄂爾多斯高原堿湖鈍頂螺旋藻多糖ESP和非洲Chad湖鈍頂螺旋藻多糖FSP。
　　 紙層析法、紫外光譜法、比旋光度法和SephadexG-100凝膠柱層析法檢驗(yàn)ESP和FSP都為均一的多糖組分：低溫冷凍干燥后ESP為乳白色絮狀結(jié)晶，F(xiàn)SP為黃色絮狀結(jié)晶，二者均為易溶于水的水溶性多糖。硫酸一苯酚法測(cè)定ESP和FSP的多糖含量分別為89.75％和62.87％；非糖成分檢測(cè)發(fā)現(xiàn)ESP和FSP

3、中殘留的非糖成分主要為灰分，其次為少量蛋白質(zhì)，初步推斷這兩種多糖均為蛋白結(jié)合多糖。
　　 在上述研究基礎(chǔ)上采用SephadexG-150凝膠柱層析、TLC、HPLC、IR、NMR等技術(shù)方法分別對(duì)ESP和FSP進(jìn)行了分子量和結(jié)構(gòu)的研究。結(jié)果：ESP和FSP的分子量分別為77625 D和85114 D。ESP糖鏈的連接方式主要為[α-Glc(1→4)-]n，還有少量的α-Glc(1→6)-、α-Fuc(1→2)-和β-Xyl(1→3

4、)-，-α-Rha為末端糖基：構(gòu)成其糖鏈的單糖主要是α-吡喃型的己糖，占比例最大的是葡萄糖，其次為鼠李糖和少量的阿拉伯糖、木糖、半乳糖、甘露糖和果糖。FSP糖鏈的連接方式為α-Glc(1→6)-和α-Xyl(1→2)，-β-Xyl、-β-Gal和-α-Rha為末端糖基；構(gòu)成其糖鏈的主要是α-或β-型的吡喃葡萄糖，其次是鼠李糖和少量的木糖、甘露糖、半乳糖和阿拉伯糖。
　　 (2)采用管碟法研究了ESP和FSP這兩種多糖的體外抗菌活

5、性。結(jié)果：ESP和FSP均有抑菌作用，但抑制效果與多糖濃度、細(xì)菌種類有關(guān)。ESP在20 mg/mL和40 mg/mL添加量時(shí)均表現(xiàn)出對(duì)痢疾桿菌有較明顯的抑制作用，抑菌圈分別為14.17 mm和12.16 mm。FSP表現(xiàn)為在20 mg/mL添加量時(shí)對(duì)痢疾桿菌、假單孢綠膿桿菌和變形桿菌有抑制作用，抑菌圈分別為12.13 mm、9.10 mm和9.07 mm。
　　 (3)采用S180腹水瘤動(dòng)物模型，考察了ESP和FSP對(duì)小鼠體內(nèi)S

6、180腹水瘤的抑制作用，同時(shí)采用MTT和ELISA等實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法檢測(cè)了ESP和FSP對(duì)腫瘤鼠脾淋巴細(xì)胞增殖及免疫細(xì)胞因子水平的影響，初步探討了ESP和FSP對(duì)荷瘤小鼠免疫增強(qiáng)作用的分子機(jī)制。結(jié)果：ESP和FSP均能改善荷瘤小鼠的生存質(zhì)量，抑制小鼠S180移植性腫瘤的生長(zhǎng)，縮小腫瘤在體內(nèi)的浸潤(rùn)范圍，延長(zhǎng)小鼠的生存時(shí)間，中劑量的作用效果最明顯，對(duì)荷瘤小鼠的生命延長(zhǎng)率分別達(dá)到50.67％和52.00％。
　　 對(duì)免疫功能的影響表現(xiàn)為，

7、能在一定程度上降低腫瘤小鼠的臟器損傷，提高腫瘤小鼠的胸腺和脾臟指數(shù)，進(jìn)而提高小鼠的免疫功能；在抑制腫瘤生長(zhǎng)的同時(shí)，ESP和FSP還能夠提高荷瘤小鼠血清IL-2、TNF-α和IFN-γ水平。在體外，ESP和FSP均能夠促進(jìn)ConA誘導(dǎo)的荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)。ESP和FSP中劑量組的對(duì)荷瘤小鼠免疫細(xì)胞因子、脾淋巴細(xì)胞增殖和免疫器官指數(shù)的影響最明顯。以上分析表明，適宜劑量的ESP和FSP對(duì)S180腹水型腫瘤有明顯的抑制作用，并能增強(qiáng)荷

8、瘤小鼠由T細(xì)胞主導(dǎo)的細(xì)胞免疫功能，提高機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用，免疫調(diào)節(jié)可能是其抗腫瘤作用的機(jī)制之一。
　　 (4)采用MTT法研究了ESP和FSP體外對(duì)小鼠肉瘤S180，小鼠白血病細(xì)胞L1210、人慢性髓性白血病細(xì)胞K562和小鼠淋巴瘤細(xì)胞YAC-1生長(zhǎng)的影響；采用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)研究ESP和FSP對(duì)S180細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響。
　　 結(jié)果：
　　 ESP和FSP高、中、低三個(gè)

9、劑量組對(duì)小鼠肉瘤細(xì)胞S180、小鼠白血病細(xì)胞L1210、人慢性髓性白血病細(xì)胞K562、小鼠淋巴瘤細(xì)胞YAC-1的體外增殖均有不同程度的抑制作用；但是，僅ESP和FSP中劑量組對(duì)K562的抑制率超過(guò)了30％，分別為35.88％和33.98％。ESP和FSP均表現(xiàn)出中劑量的對(duì)這4種腫瘤細(xì)胞體外增殖活性的抑制作用最明顯，但其對(duì)S180、YAC-1和K562的抑制作用均顯著低于CTX組(P＜0.05)。與黃芪糖組相比，僅ESP和FSP中劑量組對(duì)