左歸丸對(duì)PMOP大鼠腎組織中TGF-β1-Smad4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 研究左歸丸對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥（PMOP）大鼠腎組織中TGF-β1/Smad4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)作用，探討左歸丸防治PMOP的作用機(jī)制。
　　 材料與方法：
　　 選用79只四月齡雌性SD大鼠，采用雙側(cè)切除卵巢術(shù)模擬大鼠PMOP模型，按隨機(jī)原則將大鼠分成7組：正常組，假手術(shù)組、模型空白組、左歸丸高劑量組、左歸丸中劑量組、左歸丸低劑量組、尼爾雌醇組。以尼爾雌醇片為陽(yáng)性對(duì)照藥物，連續(xù)60d施加灌胃處理因素

2、，觀察左歸丸對(duì)PMOP大鼠的治療作用。取材前1d收取大鼠24h尿樣，停藥后次日處死全部大鼠，收集血樣，運(yùn)用ELISA法測(cè)定血清骨鈣素（BGP）含量，利用TPAP法檢測(cè)各組大鼠血清堿性磷酸酶（ALP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）活性及尿羥脯氨酸與肌酐比值（HOP/Cr）的變化。取大鼠左側(cè)股骨遠(yuǎn)端1/3近關(guān)節(jié)部位，制作脫鈣骨切片，并用顯微圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)。仔細(xì)分離大鼠右側(cè)股骨，采用雙能X線骨密度儀進(jìn)行骨密度（BM

3、D）測(cè)定。取大鼠子宮稱量濕重，計(jì)算子宮指數(shù)（子宮濕重/體重），并做常規(guī)HE染色，光鏡下觀察各組大鼠子宮內(nèi)膜及腺體的變化。為了深入研究左歸丸防治PMOP的作用機(jī)制，無(wú)菌取大鼠雙側(cè)腎臟，光鏡下觀察左側(cè)腎組織病理變化，留取右側(cè)腎髓質(zhì)約100g，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）測(cè)定腎組織中TGF-β1、Smad4的mRNA表達(dá)水平，觀察左歸丸對(duì)PMOP大鼠腎組織中TGF-β1/Smad4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。
　　 結(jié)果：

4、r>　　 1.子宮組織的檢測(cè)：與正常組相比，模型空白組大鼠子宮指數(shù)顯著降低（P<0.05）。尼爾雌醇組子宮指數(shù)與模型空白組相比明顯升高（P<0.05），左歸丸（高、中、低）劑量組雖有微弱的升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。病理切片顯示：模型空白組大鼠子宮萎縮、宮腔變小、內(nèi)膜變??；左歸丸（高、中、低）劑量組子宮內(nèi)膜增厚及腺體增生不明顯，尼爾雌醇組子宮萎縮不明顯，且腺體豐富。
　　 2.骨代謝指標(biāo)的檢測(cè)：①骨形成指標(biāo)：與正常組

5、相比，模型空白組大鼠血清BGP、ALP含量顯著升高（P<0.05），左歸丸（高、中、低）劑量組均能降低去卵巢大鼠血清BGP、ALP的含量，但以高、中劑量組有顯著性差異（P<0.05）。②骨吸收指標(biāo)：模型空白組大鼠血StrACP含量、尿HOP/Cr與正常組相比顯著升高（P<0.05），左歸丸（高、中、低）劑量組均能降低去卵巢大鼠StrACP、尿HOP/Cr，其中以高劑量組作用效果最明顯（P<0.05）。
　　 3.骨組織病理表現(xiàn)及

6、形態(tài)計(jì)量參數(shù)測(cè)定：模型空白組大鼠骨小梁減少、變細(xì)甚至斷裂，左歸丸高、中、低劑量組骨小梁數(shù)量增多、結(jié)構(gòu)完整、排列緊密。骨形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)定，模型空白組骨小梁面積百分率（Tb.Ar）與正常組相比顯著降低（P<0.05），左歸丸（高、中）劑量組Tb·Ar（％）均升高（P<0.05），以高劑量組最顯著，且與尼爾雌醇組相比，無(wú)顯著差異（P>0.05）。
　　 4.股骨骨密度的檢測(cè)：模型空白組股骨近端、股骨整體骨密度測(cè)量值與正常組相比顯著降低（

7、P<0.05），左歸丸（高、中、低）劑量組骨密度含量均增高，其中以高、中劑量組的升高趨勢(shì)最大（P<0.05），與尼爾雌醇組相比，無(wú)顯著差異（P>0.05）。
　　 5.腎組織病理學(xué)檢測(cè)：與正常組相比，模型空白組大鼠腎組織變化不明顯，未發(fā)現(xiàn)膠原纖維沉積等病理變化，左歸丸（高、中、低）劑量組及尼爾雌醇組中腎組織結(jié)構(gòu)清晰，無(wú)明顯腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)程。
　　 6.腎組織中TGF-β1、Smad4的mRNA表達(dá)：與正常組相比，模型空

8、白組大鼠腎組織中TGF-β1、Smad4的mRNA水平異常增高（P<0.05），左歸丸（高、中、低）劑量組都可有力地下調(diào)去卵巢大鼠腎組織中TGF-β1、Smad4的mRNA表達(dá)，且下調(diào)力度均強(qiáng)于尼爾雌醇組，但以左歸丸低劑量組下調(diào)力度最強(qiáng)。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過(guò)雙側(cè)切除卵巢術(shù)成功模擬并確定大鼠PMOP模型。
　　 2.左歸丸能有效地防治大鼠PMOP。
　　 3.左歸丸可以有力地下調(diào)PMOP模型大鼠腎