楊梅葉原飛燕草素提取物的純化和對肥胖的抑制效果的研究.pdf

1、原花色素(pro anthocyanidins)是一種植物多酚，屬于芳香族二次代謝產物。由于它的多羥基結構，原花色素擁有很強的抗氧化活性，以及其他與抗氧化相關的活性功能。原花色素在自然界分布廣泛，例如松樹皮和葡萄籽等，在許多植物組成部分中含量很高。浙江特產楊梅(Myrica rubra Sieb.et Zucc.)的樹葉含有豐富的原花色素，經分析鑒定其類型基本為原飛燕草素(prodelphinidins)，而原飛燕草素因為其棓酸酯化結構

2、而具有更強大的抗氧化性。
　　肥胖是社會經濟發(fā)展后的一種普遍存在的生理疾病，在發(fā)達國家中尤為常見，其產生原因與體內氧化應激水平密切相關。肥胖不僅會給日常生活帶來許多不便，更重要的是它會誘發(fā)一系列心血管疾病甚至是癌癥，嚴重威脅人類的生命健康。為了避免肥胖帶來的危害，相關科學家始終致力于減肥藥品的開發(fā)，目前市面上販賣的許多減肥藥品主要分為兩類，一類是以奧利斯它(Orlistat)為主要成分的減肥藥，是僅存的低毒副作用的人工合成藥物，另

3、一類則是五花八門的天然產物制品和保健品，只有少量的探索性文章提供理論數據，缺乏大量的臨床研究，藥效存在較多不確定性。
　　由于肥胖產生的原因多種多樣，從食物攝入角度可以進行調控的方向有三種:一是減少過高能量食物的攝入，二是控制并減少能量被人體吸收利用，三是加快能量的轉化，并且盡量避免能量以白色脂肪的形式保存在人體內。第一個方向可以由人類自行控制，目前較為常見的就是以低能量的代餐代替主食，而第二和第三個方向就是減肥藥需要研究和發(fā)揮作

4、用的地方。
　　本文以楊梅葉作為研究對象，在前人基礎上進一步分離純化出去糖的楊梅葉原飛燕草素提取物，在考慮到經濟成本的前提下大大提升了其利用價值，并通過研究對胰脂肪酶和磷脂酶A1活性的抑制來分析能量的吸收利用情況，對3T3-L1前脂肪細胞以及SD大鼠的影響來分析能量的轉化情況，與Orlistat進行比較，評價了楊梅葉原飛燕草素對于肥胖的抑制效果，主要研究結果如下:
　　以荸薺種楊梅葉為原料，以丙酮浸提原飛燕草素，并以正己烷和

5、二氯甲烷萃取后采用HPD-500型大孔樹脂吸附分離原飛燕草素，洗去糖類物質。結果顯示經過大孔樹脂的吸附，樣品中的糖含量由原來的24.7％下降到了0.5％，實現了較好的去糖目的，使得楊梅葉原飛燕草素粗提物中原飛燕草素的含量進一步得到提升，從26％達到了53％，更能夠在后續(xù)試驗中說明構效關系。
　　將楊梅葉粉末(Leaf powder of Chinese bayberry,LCB)，未經大孔樹脂去糖的楊梅葉原飛燕草素提取物(Non-

6、desugar prodelphinidins extract，NDPE)和經過大孔樹脂吸附去糖的提取物(Desugar prodelphinidins extract，DPE)，與Orlistat進行比較，檢驗它們對于胰脂肪酶和磷脂酶A1在體內外活性的影響。胰脂肪酶和磷脂酶A1能夠催化體外攝入的脂肪分解成人體能夠利用的甘油和脂肪酸，為脂肪的進一步合成利用奠定基礎。經過測定，Orlistat與DPE均能夠有效抑制這兩種酶的活性，從而減少

7、了人體對膳食脂肪的吸收利用。其中DPE對胰脂肪酶和磷脂酶A1的體外活性抑制率分別為90.9％和96.7％，而在動物試驗中，DPE對大鼠小腸中胰脂肪酶和磷脂酶A1的活性抑制率分別為，91.4％和87.7％，相較于另兩組原花色素提取物更表現出與體外一致的結果，其抑制脂肪消化酶活性能力值得肯定。
　　將LCB、NDPE和DPE與Orlistat進行比較，檢驗它們對于3T3-L1前脂肪細胞的分化、脂肪生成和堆積的影響。經過測定，Orlis

8、tat能夠最有效顯著地減少脂肪的生成和堆積，其次依次是DPE、NDPE和LCB。在抑制3T3-L1前脂肪細胞分化為脂肪細胞方面，DPE能夠有效降低誘導脂肪細胞分化的蛋白因子表達量，表現出最好的效果，而其他組分并沒有表現出抑制脂肪細胞分化的效果。綜合考慮，DPE對于3T3-L1前脂肪細胞的抑制作用更為全面有效。
　　將LCB、NDPE和DPE與Orlistat進行比較，檢驗它們在飼喂SD大鼠兩個月的過程中，對大鼠體重、內臟指數、血清

9、指標以及與能量轉化相關的生物指標的變化。在飼養(yǎng)過程中，先給普通大鼠飼喂高脂飼料，造出體重高于正常飼喂大鼠10％的肥胖模型，然后對肥胖大鼠進行待測樣品的灌胃試驗，期間隔天對試驗大鼠進行稱重，在試驗結束時對大鼠進行取全血處死，解剖后摘取肝臟、腎臟、附睪以及腹腔脂肪，分別檢測血清與內臟中與能量轉化相關的一些生物指標，得到結果顯示DPE不僅能夠有效控制大鼠的體重，減少腹腔內可見的脂肪，而且在各個指標中都能達到很好的效果，有效地通過抑制沉默調節(jié)因

10、子1(Sirtuin type1，SIRT1)的表達減少了白色脂肪細胞的分化，并通過解偶聯(lián)蛋白1(Uncoupling protein1，UCP1)表達量的分析證實了能夠快速消耗能量的褐色脂肪的生成，一些指標甚至超過了Orlistat的水平。對SD大鼠解剖下來的肝臟進行切片處理，HE染色后觀察期脂肪肝的病變情況。結果顯示DPE能夠有效減輕肝臟由于高脂攝入引起的脂肪肝癥狀，肝臟細胞中的油滴明顯減少，且沒有出現肝硬化的現象。
　　綜上