大血藤、石楠和雞血藤提取物原花青素的研究.pdf

1、原花青素是黃烷-3-醇類化合物以不同方式縮合而成的多聚物，由植物類黃酮次生代謝途徑合成，在植物界普遍散布。研究報(bào)道，原花青素具有廣泛而強(qiáng)烈的生物活性，能夠保護(hù)皮膚和生殖系統(tǒng)，改善免疫抑制等，被稱為自然界最強(qiáng)的自由基清除劑。
　　本研究針對(duì)大血藤、石楠和雞血藤，使用超聲波提取、有機(jī)溶劑連續(xù)萃取原花青素，使用香草醛-鹽酸法和對(duì)-二甲氨基肉桂醛法對(duì)原花青素進(jìn)行含量測(cè)定;使用大孔吸附樹脂法純化原花青素;繼而評(píng)價(jià)其抗氧化活性;考察其對(duì)糖苷酶

2、和膽堿酯酶的抑制活性;并使用紫外吸收光譜(Ultraviolet absorption spectrum，UV)、紅外吸收光譜(Infrared absorption spectrum，IR)、反相高效液相色譜(Reverse phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)、基質(zhì)輔助激光解吸附離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜(Matrix-assisted laser desorption/

3、ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)和核磁共振碳譜(13C nuclear magnetic resonance，13C-NMR)綜合分析原花青素的結(jié)構(gòu)。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　1、對(duì)大血藤（Sargentodoxae caulis）原花青素進(jìn)行提取和純化，采用香草醛-鹽酸比色法測(cè)定各樣品原花青素含量，評(píng)價(jià)其抗氧化活性和酶抑制活性。結(jié)果表明:大血藤

4、粗提物、石油醚萃取物、乙酸乙酯與水兩相不溶物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水相留余物中原花青素含量分別為（36.03±0.40）％、（1.19±0.11）％、(57.99±0.22)％、（32.40±0.07）％、（25.03±0.08）％和（41.32±0.37）％，經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20純化后，大血藤原花青素純化物含原花青素（98.35±0.72）％，約為粗提物的2.73倍。大血藤原花青素純化物對(duì)DPPH.清除活

5、性（IC50=70.70±1.38μg/mL）是L-抗壞血酸(Vc)（IC50=78.89±1.67μg/mL）的1.12倍;抑制α-葡萄糖苷酶活性(IC50=4.37±0.17μg/mL)是阿卡波糖(IC50=527.51±19.97μg/mL)的120.71倍。說(shuō)明大血藤提取物含有豐富的原花青素，并具有很強(qiáng)的體外抗氧化活性和酶抑制活性。
　　2、為考察石楠提取物（Photinia serrulata）抗氧化活性與原花青素、多酚

6、和黃酮含量之間的關(guān)系以及溶劑對(duì)抗氧化活性的影響，分別采用去離子水、85％甲醇、80％乙醇和70％丙酮對(duì)石楠枝-韌皮部、枝-木質(zhì)部、老葉、幼葉、花序-軸、花序-小花、果序-軸和果序-果實(shí)進(jìn)行超聲提取，測(cè)定其原花青素、多酚和黃酮含量，評(píng)價(jià)其抗氧化活性。結(jié)果表明:石楠不同部位提取物抗氧化活性差異顯著，枝-韌皮部和果序-軸提取物抗氧化活性最強(qiáng);不同溶劑的提取效果差異極顯著，枝-韌皮部提取物原花青素含量為（10.77±0.08）％～(29.31±

7、0.69)％;黃酮含量為（2.60±0.02）％～（7.02±0.01)％;多酚含量為（3.15±0.02）％～（6.42±0.07）％，其中85％甲醇提取原花青素效果最好，70％丙酮提取多酚和黃酮效果最好。相關(guān)性分析表明石楠提取物抗氧化活性與原花青素、多酚和黃酮含量呈現(xiàn)極顯著正相關(guān)(P＜0.01)，說(shuō)明石楠提取物原花青素、多酚和黃酮可能作為石楠抗氧化成分協(xié)同發(fā)揮抗氧化活性。
　　3、采用大孔吸附樹脂對(duì)雞血藤（Spatholobi

8、 caulis）原花青素進(jìn)行純化，比較D101、X-5及AB-8樹脂對(duì)雞血藤原花青素靜態(tài)吸附及解吸附能力，篩選出X-5型樹脂用于純化。對(duì)X-5型樹脂的動(dòng)態(tài)吸附及解吸附條件進(jìn)行優(yōu)化，獲得最適條件:上樣質(zhì)量濃度為6.00mg/mL時(shí)，上樣流速2BV/h，上樣量10BV，洗脫流速1BV/h，洗脫劑用量2BV。使用70％乙醇洗脫得到的純化物(F70)中原花青素含量最高，為(97.53±0.27)％，是粗提物（48.81±0.34）％的2倍;對(duì)D

9、PPH·清除活性（IC50=75.48±0.60μg/mL）是標(biāo)準(zhǔn)品L-抗壞血酸(Vc)（IC50=95.15±1.54μg/mL）的1.26倍;對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性（IC50=4.79±0.06μg/mL）是標(biāo)準(zhǔn)品阿卡波糖（IC50=515.23±17.35μg/mL）的107.56倍。說(shuō)明雞血藤提取物原花青素含量豐富，具有很強(qiáng)的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性。
　　4、利用紫外吸收光譜、紅外吸收光譜、RP-HPLC、M