基于基質(zhì)固相分散萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的植物激素分析.pdf

1、U n i v e r s i t y o f S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y o f C h i n aA d i s s e r t a t i o nf o r d o c t o r ，Sd e g r e eD e t e r m i n a t i o n o f p l a n th o r m o n e sb y m a t r i x s o l i d ．．p h a

2、s ed i s p e r s i o n - - h i g hp e r f o r m a n c eli q u i dc h r o m a t o g r a p h y _ t a n d e mm a s s s p e c t r o m e t r yA u t h o r ’S N a m e ：S p e c i a l i t y ：S u p e r v i s o r ：F i n i s h e d t

3、 i m e ：L u W a n gA n a l y t i c a | C h e m i s t r yP r o f ．Y a f e n gG u a nO c t1 0 出，2 0 1 4摘要摘要植物激素是小分子天然產(chǎn)物，在低濃度時(shí)就能夠調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)和發(fā)育。精確測(cè)定植物激素的含量，對(duì)深入研究其在生物合成、運(yùn)輸、代謝和分子調(diào)節(jié)機(jī)制中的作用日益重要。由于植物基質(zhì)復(fù)雜，植物體中植物激素的含量極低，植物樣品的前處理方法仍是制約痕

4、量植物激素分析的一個(gè)技術(shù)瓶頸，并影響植物學(xué)研究。因此，發(fā)展高效的樣品前處理技術(shù)，結(jié)合分離檢測(cè)技術(shù)，建立高選擇性、高靈敏度、高可靠性的植物激素定性定量分析方法，是推動(dòng)植物學(xué)機(jī)理深入研究的關(guān)鍵。目前，植物激素的分析通常采用繁瑣的樣品前處理方法，一般包含過夜浸提、溶劑萃取、固相萃取凈化或色譜凈化、制備液相色譜純化等多個(gè)步驟，方法萃取效率較低，耗時(shí)長(zhǎng)( 一般需要數(shù)天) 。鑒于此，本論文致力于發(fā)展新型樣品前處理方法，結(jié)合色譜．質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，實(shí)現(xiàn)植

5、物樣品中赤霉素、油菜素甾醇和細(xì)胞分裂素等重要植物激素的高靈敏、高選擇分析，取得的主要研究成果如下：( 1 ) 將基質(zhì)固相分散( M a t r i x S o l i d ．P h a s eD i s p e r s i o n ，M S P D ) 萃取用于擬南芥中赤霉素的選擇提取，并將其與液相色譜．串聯(lián)質(zhì)譜( L C ．M S ／M S ) 聯(lián)用，建立了三種赤霉素( G A l ，G A 3 ，G A 4 ) 的定量分析方法。通過

6、對(duì)樣品前處理?xiàng)l件、色譜分離條件和質(zhì)譜檢測(cè)條件的優(yōu)化，檢測(cè)靈敏度達(dá)到1 ．1 ～4 ．1 n g ／g 。用于三份擬南芥實(shí)際樣品，檢測(cè)出其中G A l ，G A 3 和G ～的含量分別為1 1 ．2 0 ～1 5 ．1 4n g ／g ，1 ．1 5 ～1 ．5 3n g ／g ，2 ．0 8 ～3 ．4 3n g ／g 。方法具有操作簡(jiǎn)單、選擇性好、回收率高等優(yōu)點(diǎn)。( 2 ) 采用預(yù)裝填固相萃取分散劑的方式，結(jié)合靜態(tài)平衡萃取對(duì)基質(zhì)固相分

7、散萃取進(jìn)行改進(jìn)，并用于水稻樣品中的痕量赤霉素的選擇性提取。通過對(duì)靜態(tài)平衡時(shí)間，樣品與分散劑比例，分散劑材料以及洗脫溶劑的優(yōu)化，減少了基質(zhì)效應(yīng)，獲得了更高的提取效率。將其與L C —M 3 ／M S 聯(lián)用分離分析八種赤霉素，檢測(cè)限達(dá)到0 ．0 3 ～0 ．6 7 n g ／g 。八種赤霉素在低添加濃度下回收率為4 6 ．6 ％～1 1 7 ．9 ％，R S D 值在3 9 ．3 ％以下；在較高添加濃度下，赤霉素的回收率分別在6 9 ．3

8、％- 1 2 2 ．5 ％( 2 5n g ／g ) 和8 5 ．7 ％～1 1 9 ．O ％( 3 5n g ／g ) ，其R S D 分別小于1 1 ．3 ％和4 ．6 ％。結(jié)果表明，預(yù)裝填分散劑和靜態(tài)平衡萃取能有效提高M(jìn) S P D 過程對(duì)痕量赤霉素的萃取效率，降低基質(zhì)效應(yīng)，是提高檢測(cè)靈敏度的有效手段。( 3 ) 建立了一種串聯(lián)M S P D ．M A X ．M C X 樣品前處理方法，對(duì)植物中痕量油菜素甾醇( B r a s s