自發(fā)性高血壓大鼠FXYD5基因的時(shí)空表達(dá)分布.pdf

1、目的：探討自發(fā)性高血壓大鼠(SpontaneouslyHypertensiveRat，SHR)高血壓形成的遺傳因素。研究大鼠FXYD5(FXYDdomain-containingiontransportregulator5)基因在SHR及對(duì)照組正常血壓大鼠(Wistar-KyotoRat，WKY)的表達(dá)水平的時(shí)間與空間分布差異。同時(shí)檢驗(yàn)基因FXYD5與Na+，K+-ATP酶α1，β1亞單位在mRNA表達(dá)水平有無(wú)一致性。 方法：以

2、載體法建立FXYD5與PBS載體的質(zhì)粒，然后按照美國(guó)羅氏公司的地高辛標(biāo)記RNA探針合成試劑盒在體外逆轉(zhuǎn)錄獲得地高辛標(biāo)記的FXYD5的cRNA探針。這種探針合成方法特異性較好，合成探針濃度高。分別取4周、8周、13周及21周齡SHR和WKY各3只，戊巴比妥腹腔注射麻醉后尾動(dòng)脈測(cè)量其收縮壓水平，確定其血壓狀態(tài)。麻醉處死后取大鼠的腎臟、肺、肝臟、腸系膜、腦和心臟組織，以同周齡WKY作對(duì)照，采用NorthernBlot的方法分析FXYD5的表達(dá)

3、豐度。比較FXYD5在相同周齡的SHR大鼠不同組織的表達(dá)差異，并且比較相同周齡的SHR和WKY的腎臟和肺組織中的表達(dá)水平的差異。用RT-PCR法檢驗(yàn)FXYD5與Na+，K+-ATP酶α1，β1亞單位在mRNA表達(dá)水平有無(wú)一致性。 結(jié)果：SHR血壓在出生4周以后逐漸升高，8周左右已經(jīng)形成高血壓，至13周其血壓保持在一個(gè)較高的水平。NorthernBlot的結(jié)果提示：肺組織和腸系膜動(dòng)脈組織中其表達(dá)水平最高，而在腎臟，心臟，腦組織也有

4、較少的表達(dá)。另外對(duì)于相同周齡相同的SHR和WKY的比較發(fā)現(xiàn)在4周、8周的SHR和WKY的腎組織中FXYD5的表達(dá)沒(méi)有差異，而在13周的SHR的腎組織其表達(dá)明顯低于WKY(SHR組較WKY組下調(diào)了近76％，P=0.000，P＜0.01)，而21周齡的SHR也有相同的表現(xiàn)，但是21周齡組SHR的這種表達(dá)下調(diào)并沒(méi)有在13周那么明顯(SHR組較WKY組的下調(diào)了約25％，P=0.022，P＜0.05)。而在肺組織，除8周齡該基因的表達(dá)水平在SHR

5、組略低于WKY組外，其他周齡兩組沒(méi)有差別。FXYD5在WKY的不同周齡組腎臟組織的表達(dá)水平呈現(xiàn)由4周開(kāi)始逐漸升高，到13周左右達(dá)到高峰，隨后下降至21周左右其水平已經(jīng)低于4周的水平。SHR中FXYD5的表達(dá)形式雖然也有高峰現(xiàn)象，但是高峰出現(xiàn)的時(shí)間和幅度都不同于WKY組。其高峰出現(xiàn)的時(shí)間為8周左右而表達(dá)水平明顯低于13周的WKY組。WKY和SHR腎臟組織的Na+，K+-ATP酶α1，β1亞單位的表達(dá)水平無(wú)明顯差異。 結(jié)論：SHR與