組蛋白乙酰化修飾調(diào)控IL-4-STAT6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路基因轉(zhuǎn)錄活性的分子機(jī)制的研究.pdf

1、研究目的：細(xì)胞因子與其受體結(jié)合后啟動(dòng)復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)分子間的相互作用，最終引起細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄的變化，這一過(guò)程稱為細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。STAT6是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子STATs家族的一員，可被細(xì)胞因子IL-4特異性激活。IL-4與其受體結(jié)合后，循JAK/STAT6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，將活化信號(hào)通過(guò)蛋白質(zhì)的相互作用逐級(jí)傳遞，最終激活特異性轉(zhuǎn)錄激活因子STAT6并啟動(dòng)靶基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，促進(jìn)靶蛋白的合成。IL-4/STAT6信號(hào)通路的過(guò)度活躍參與包括哮喘等

2、變態(tài)反應(yīng)性疾病、腫瘤等多種疾病的進(jìn)程。大量研究顯示STAT6-TAD可結(jié)合一系列轉(zhuǎn)錄共激活因子p100、CBP和NCoA-1等來(lái)提高STAT6介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活性和基因表達(dá)水平。但迄今為止，STAT6轉(zhuǎn)錄調(diào)控的機(jī)制尚不明確。PSF蛋白是我們前期通過(guò)GST融合蛋白釣取結(jié)合質(zhì)譜分析技術(shù)發(fā)現(xiàn)的在IL-4刺激后可與STAT6-TAD結(jié)合的抑制IL-4/STAT6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路靶基因之一-Igε基因轉(zhuǎn)錄活性的轉(zhuǎn)錄抑制因子。我們前期的細(xì)胞內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了IL-

3、4刺激后PSF可將HDAC1募集到STAT6轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中。本課題的研究目的在于初步探討組蛋白乙?；揎椪{(diào)控IL-4/STAT6信號(hào)傳導(dǎo)通路基因轉(zhuǎn)錄活性的分子機(jī)制。
　　 方法：本課題分兩部分進(jìn)行：第一部分采用激光共聚集顯微鏡觀察法與免疫共沉淀法(Co-Immunoprecipiration)來(lái)研究PSF與STAT6特異性結(jié)合及兩者結(jié)合的功能片段。第二部分是采用染色質(zhì)免疫共沉淀法(ChromatinImmunoprecipitat

4、ion Assay，ChIP)驗(yàn)證PSF通過(guò)影響特異性組蛋白乙酰化修飾來(lái)調(diào)控IL-4/STAT6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路轉(zhuǎn)錄活性及采用甘油密度梯度離心法分離蛋白復(fù)合物，探討隨著IL-4刺激時(shí)間的延長(zhǎng)，PSF如何參與組成STAT6轉(zhuǎn)錄活性相關(guān)的HDACs復(fù)合物。
　　 結(jié)果：①IL-4刺激后PSF與STAT6呈現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)共定位；PSF通過(guò)STAT6-TAD與STAT6在細(xì)胞內(nèi)直接結(jié)合；IL-4誘導(dǎo)STAT6與PSF發(fā)生酪氨酸磷酸化是二者結(jié)合的先

5、決條件②PSF影響Igε啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白乙?；种艻gε啟動(dòng)子的基因表達(dá)；ChIP揭示IL-4刺激后TSA處理影響Igε啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白乙?；癄顟B(tài)從而增強(qiáng)Igε啟動(dòng)子的基因表達(dá)；隨著IL-4刺激時(shí)點(diǎn)的延長(zhǎng)，PSF作為基因轉(zhuǎn)錄抑制因子，通過(guò)募集HDAC1等蛋白因子形成HDACs復(fù)合物，動(dòng)態(tài)性參與調(diào)控IL-4/STAT6介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄活性。
　　 結(jié)論：OIL-4誘導(dǎo)STAT6與PSF酪氨酸磷酸化后，PSF與STAT6-TAD結(jié)合