肺念菌素B0的發(fā)酵工藝研究.pdf

1、肺念菌素B0為一種絲狀真菌產(chǎn)生的抗真菌活性物質(zhì)，由于其本身具有一定的溶血性質(zhì)，需要通過化學(xué)修飾進(jìn)行改造，才能用于人體?？ú捶覂艟褪欠文罹谺0經(jīng)過結(jié)構(gòu)修飾的首個(gè)上市的棘白菌素類抗真菌藥物，它是β-1，3-D-葡聚糖合成酶的非競爭性抑制劑，主要用于念珠菌屬和曲霉菌屬等的感染。由于肺念菌素B0化合物的發(fā)酵工藝復(fù)雜，國際上能成功開發(fā)并進(jìn)行生產(chǎn)的廠家稀少，因此進(jìn)行該產(chǎn)品的工藝研究具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
　　本課題采用實(shí)驗(yàn)室已篩選改良過的肺念

2、菌素B0生產(chǎn)菌株HS707-3796進(jìn)行發(fā)酵工藝的研究。
　　首先，在250ml搖瓶上進(jìn)行工藝條件摸索，確定了關(guān)鍵的工藝控制參數(shù)。發(fā)酵培養(yǎng)溫度采用變溫培養(yǎng):周期0-72h，27℃培養(yǎng);周期72-288h，25℃培養(yǎng);搖瓶裝量20ml/250ml;種子培養(yǎng)周期36-48hr;移種量為12％。試驗(yàn)證明剪切力對發(fā)酵有顯著的負(fù)面影響，在工藝控制中應(yīng)通過調(diào)控手段減少剪切力的影響因素.
　　通過碳源、氮源單因素試驗(yàn)，鹽離子濃度實(shí)驗(yàn)，微量

3、元素實(shí)驗(yàn)以及前體物添加實(shí)驗(yàn)，得出最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:甘露醇12％，葡萄糖1.0％，甘油0.8％，黃豆餅粉2.8％，酵母粉0.7％，玉米漿干粉0.7％，硫酸銨0.4％，KH2PO40.7％，F(xiàn)eSO4·7H2O0.04％，MnSO4·4H2O35ppm，ZnSO4·7H2O85ppm，脯氨酸0.9％，初始pH6.6-6.9。滅菌方式采用121℃，35min以內(nèi)。經(jīng)過這幾個(gè)工藝參數(shù)的研究和確立，發(fā)酵效價(jià)由原先的469μg/ml提高到131

4、2μg/ml，為發(fā)酵小試工藝優(yōu)化及中試工藝放大提供了有力的數(shù)據(jù)支持。
　　其次，在50L全自動(dòng)通用發(fā)酵罐上進(jìn)行了肺念菌素B0的發(fā)酵工藝研究，通過控制和調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速、攪拌葉形式，補(bǔ)加前體以及pH、溶氨、溶氧、通氣量、種子級數(shù)、碳源流加等試驗(yàn)，結(jié)果表明肺念菌素B0發(fā)酵的最佳工藝為:使用傾斜葉片圓盤渦輪槳，發(fā)酵過程中流加前體并控制脯氨酸殘留量在0.20％，pH用氨水控制在5.6。最低溶氧控制在30％以上，放大時(shí)可采用三級發(fā)酵。使用以上最