殺念菌素高產(chǎn)菌株的構(gòu)建.pdf

1、殺念菌素是一種具有廣譜抗真菌活性的七烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，產(chǎn)生于鏈霉菌FR—008（Streptomyces sp.FR—008）或灰色鏈霉菌IMRU3570（Streptomyces griseus IMRU3570）。本文以鏈霉菌FR—008的突變株ZYJ—6作為出發(fā)菌株，通過基因工程技術(shù)引入農(nóng)業(yè)生物藥物模型基因，如引入全局性正調(diào)節(jié)基因adpAc、前體物合成基因S—腺苷甲硫氨酸合成酶基因metK、透明顫菌血紅蛋白基因vgb和敲除廣泛性

2、的抑制基因nsdA，研究了各個(gè)基因分別對(duì)殺念菌素合成的影響。結(jié)果表明：天藍(lán)色鏈霉菌中的adpA基因與metK基因在ZYJ—6中高效表達(dá)使殺念菌素的產(chǎn)量分別提高了10％和40％；vgb基因的異源表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞的生長且殺念菌素的合成量提高了30％； nsdA基因的敲除對(duì)殺念菌素的合成沒有影響。在此基礎(chǔ)上又分析了兩兩基因整合對(duì)該抗真菌素產(chǎn)量的影響，結(jié)果在ZYJ—6引入metK，vgb整合基因或metK，adpA整合基因都可以進(jìn)一步提高殺念菌

3、素的合成量，與出發(fā)菌株相比，殺念菌素產(chǎn)量都提高了40％。根據(jù)上述結(jié)果，我們又構(gòu)建了metK，vgb，adpA三個(gè)基因的整合表達(dá)載體，同時(shí)采用“核糖體工程技術(shù)”進(jìn)行鏈霉素、慶大霉素和利福霉素等的抗性突變株的篩選，獲得了一株殺念菌素產(chǎn)量進(jìn)一步提高了40％的鏈霉素抗性突變株STR—4。最終將metK，vgb，adpA整合基因在鏈霉素抗性突變株STR—4中進(jìn)行高效表達(dá)，獲得了能使殺念菌素產(chǎn)量提高了110％的高產(chǎn)菌株。本研究對(duì)于進(jìn)一步建立高效表達(dá)