高耐膽鹽乳酸菌的篩選、鑒定及在豆粕發(fā)酵中的應用.pdf

1、豆粕是使用最廣泛的植物性蛋白質(zhì)飼料之一，但豆粕中抗營養(yǎng)因子的存在嚴重制約了豆粕的應用，如何去除豆粕中的抗營養(yǎng)因子已成為飼料行業(yè)的重要問題。近年大量研究表明微生物發(fā)酵法能有效去除抗營養(yǎng)因子。微生物發(fā)酵法可以將大分子的蛋白質(zhì)分解為小分子的多肽和氨基酸，不僅除去了抗營養(yǎng)因子同時還提高了豆粕的營養(yǎng)利用率。乳酸菌是使用最早、分布最為廣泛的益生菌。本研究旨從健康的仔豬腸道中篩選出具有高產(chǎn)蛋白酶、高耐膽鹽特性的乳酸菌，對該菌進行鑒定、生物學特性研究，

2、進一步優(yōu)化其培養(yǎng)基成分及凍干保護劑的篩選，并用篩選出的菌株結(jié)合本實驗室保藏的枯草芽孢桿菌和植物乳桿菌進行豆粕發(fā)酵，研究其作為發(fā)酵劑發(fā)酵豆粕及對豆粕品質(zhì)的影響，為去除抗營養(yǎng)因子提高豆粕品質(zhì)的發(fā)酵劑研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴通過初篩及高產(chǎn)蛋白酶的復篩，獲得一目的菌株。該菌為革蘭氏陽性菌，菌落凸起呈圓形，直徑1.0~1.5 mm，白色，邊緣整齊，濕潤；顯微鏡下菌株為單個球形，直徑約0.8μm，無莢膜，無芽孢。經(jīng)生理生

3、化及16S rDNA鑒定，該菌株為屎腸球菌，并將其命名為WLEF-01。⑵WLEF-01的生物學特性測定的結(jié)果顯示：WLEF-01生長迅速，在0.5 h進入對數(shù)期，5 h左右達到穩(wěn)定期，穩(wěn)定期長。WLEF-01有很強的產(chǎn)酸能力，在對數(shù)期培養(yǎng)基的pH迅速下降，最終達到4.5左右。WLEF-01具有一定的耐酸能力，pH在4~6.8時存活率都維持在50％以上。該菌耐膽鹽的能力突出，在膽鹽濃度0.3%條件下作用2 h活菌率達到90%，在膽鹽濃度

4、1%的條件下作用2 h活菌率也有83%。WLEF-01對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有一定抑制作用，并對慶大霉素、復方新諾明、壯觀霉素、先鋒霉素、苯唑西林、卡那霉素、林可霉素有耐藥性。⑶通過對WLEF-01的培養(yǎng)基的優(yōu)化，最佳培養(yǎng)基為：1%乳糖、4%酵母粉、0.25%乙酸鈉、15%番茄汁、pH為6.5。最佳條件下 OD600值達到1.617。最佳的冷凍干燥的保護劑成分為：10%脫脂奶粉、5%海藻糖、5%乳糖、7.5%麥芽糊精、2.5%蛋白胨

5、， WLEF-01的存活率達到41.85%。⑷將WLEF-01和本實驗室保藏的枯草芽孢桿菌和植物乳桿菌分別進行單一菌株發(fā)酵豆粕和復合菌株發(fā)酵豆粕。試驗結(jié)果顯示：單一菌株發(fā)酵豆粕對蛋白質(zhì)分解的效果 WLEF-01＞植物乳桿菌＞枯草芽孢桿菌。復合菌株發(fā)酵對去除抗營養(yǎng)因子的效果優(yōu)于單一菌株發(fā)酵，通過復合菌株正交試驗結(jié)果顯示：接種量為枯草芽孢桿菌5%、植物乳桿菌1%、WLEF-015%效果最佳；蛋白質(zhì)分解最徹底，沒有明顯的蛋白條帶；發(fā)酵后豆粕的