基于等溫信號放大技術(shù)的石英晶體微天平檢測DNA及蛋白質(zhì).pdf

1、本文采用石英晶體微天平檢測方法，構(gòu)建了基于滾環(huán)復(fù)制放大技術(shù)、雜交鏈式反應(yīng)、酶切循環(huán)放大等系統(tǒng)，實現(xiàn)了對基因及蛋白質(zhì)的高靈敏度、高選擇性檢測。本研究主要內(nèi)容包括：
　?、爬脻L環(huán)復(fù)制放大技術(shù)與生物催化沉淀技術(shù)相結(jié)合實現(xiàn)對DNA及溶菌酶進行了高靈敏、高選擇檢測。利用適體與靶蛋白的特異性結(jié)合作用，將與適體雜交互補的 DNA釋放出來進一步與固定在電極表面的發(fā)卡探針結(jié)合，在限制性內(nèi)切酶的作用下，通過特異性識別位點剪切釋放引發(fā)鏈，同時將互補D

2、NA釋放出來形成循環(huán)放大，在T4連接酶和DNA聚合酶的作用下發(fā)生滾環(huán)復(fù)制放大反應(yīng)，形成一條具有大量重復(fù)序列的單鏈，利用生物素標記信號探針將親和素標記的HRP捕獲到芯片表面，進而引發(fā)生物催化沉淀反應(yīng)，增加芯片的質(zhì)量，從而對DNA及蛋白質(zhì)進行檢測。
　?、苹诤怂嵬馇忻秆h(huán)放大、雜交鏈式反應(yīng)及納米顆粒增強的 QCM實現(xiàn)DNA的高靈敏檢測。構(gòu)建的雜交互補雙鏈DNA探針，能夠與靶DNA的雜交互補后形成平末端結(jié)構(gòu)，在EXO III的作用下，

3、形成酶切循環(huán)放大反應(yīng)進而引發(fā)芯片上的生物素標記的 DNA發(fā)生雜交鏈式反應(yīng)，使得大量的鏈酶親和素修飾的納米金粒子因生物素與鏈酶親和素特異性結(jié)合被捕獲到芯片上。芯片質(zhì)量增加， QCM的響應(yīng)信號得到放大，從而實現(xiàn)對靶DNA的高靈敏檢測。
　?、翘岢隽俗越M裝雜交鏈式反應(yīng)放大的石英晶體微天平檢測 DNA的新方法。將自組裝雜交鏈式反應(yīng)與生物催化沉淀技術(shù)相結(jié)合，增大了芯片表面的質(zhì)量，提高了檢測靈敏度。通過芯片結(jié)合的靶DNA引發(fā)雜交鏈式反應(yīng)，進一