反式脂肪酸對內(nèi)皮細(xì)胞炎癥影響的機(jī)理研究.pdf

1、在我國，肥胖和高血壓人口達(dá)2億6千萬，每年有300萬人死于心腦血管疾病，尤其是動脈粥樣硬化。最近很多研究表明，膳食中的反式脂肪酸的含量與心血管疾病的發(fā)生有明顯關(guān)系。反式脂肪酸主要來源是被廣泛運用于食品加工的氫化油脂。研究表明，攝入含有至少一條反式雙鍵的反式脂肪酸會導(dǎo)致動脈粥樣硬化，胰島素抵抗，肥胖，高血壓和二型糖尿病的發(fā)病率提高。這些聯(lián)系可以被以下幾個機(jī)制所解釋，反式脂肪酸通過引發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)與內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷來促進(jìn)心血管疾病

2、的發(fā)生。高反式脂肪酸攝入量可以升高血清中低密度脂蛋白，降低高密度脂蛋白，引起血管內(nèi)皮損傷。除此之外，膳食中的反式脂肪酸含量還與內(nèi)皮細(xì)胞炎癥與功能損傷的代表生物標(biāo)志物的產(chǎn)生有關(guān)，反式脂肪酸的過量攝入，會提高可溶性細(xì)胞間黏附分子－1（SICAM-1）、可溶性血管細(xì)胞黏附分子－1（SVCAM-1）和E－選擇素（E-selectin）的表達(dá)。反式脂肪酸的可以通過激活細(xì)胞內(nèi) Caspase通路來促進(jìn)細(xì)胞的凋亡與內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞炎癥因子的釋放，但是否在

3、細(xì)胞膜的表面存在一個特殊的受體，接受反式脂肪酸的刺激來激活內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)仍然不清楚。近年來的研究表明，脂筏內(nèi)富含脂類和一些與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的組分，這可能就為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的有效進(jìn)行和各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的“cross talk”提供平臺，例如細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，細(xì)胞自噬等。已有文章報道，多不飽和脂肪酸如二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）等可以改變脂筏結(jié)構(gòu)，DHA還可改變脂筏脂肪環(huán)境調(diào)節(jié)白細(xì)胞介素2受體信號通路。因此猜測TFAs對細(xì)

4、胞的影響可能與脂筏結(jié)構(gòu)有關(guān)。我們通過利用甲基-β-環(huán)糊精破壞內(nèi)皮細(xì)胞的脂筏結(jié)構(gòu)，對比TFAs處理后內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的程度，探討脂筏結(jié)構(gòu)在內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)過程中的作用，為我國心血管疾病的病因及其防治提供科學(xué)依據(jù)。
　　首先，我們先通過實時熒光定量PCR檢測9c18:1和9t18:1對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）作用后，細(xì)胞炎癥因子ICAM-1，VCAM-1和IL-6的表達(dá)量。進(jìn)一步我們通過western blot檢測HUVEC細(xì)胞

5、內(nèi)炎癥相關(guān)通路在9c18:1和9t18:1處理下的變化，例如NF-κb與ERK1/2兩條通路的激活情況，探討TFAs與內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)間的關(guān)系。最后我們研究脂筏結(jié)構(gòu)對于TFAs引起內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)過程中起到的作用，在利用脂筏破壞劑甲基-β-環(huán)糊精破壞了脂筏結(jié)構(gòu)后，對比9c18:1和9t18:1所引起的HUVEC炎癥反應(yīng)。并利用western blot研究了細(xì)胞表面炎癥反應(yīng)相關(guān)受體蛋白TLR4的表達(dá)量，研究脂筏結(jié)構(gòu)與炎癥反應(yīng)中受體蛋白的關(guān)

6、系。主要取得了以下研究成果：
　　1.TFAs可以導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞炎癥因子表達(dá)量增多。9c18:1和9t18:1均能增加ICAM-1、VCAM-1、IL-6等炎癥因子mRNA表達(dá)量,但只有9t18:1使HUVEC表達(dá)炎癥因子上升具有顯著性差異。
　　2.TFAs可以激活內(nèi)皮細(xì)胞中炎癥調(diào)節(jié)通路。9t18:1可以明顯增加NF-kb通路中p65蛋白的入核，ERK1/2蛋白的磷酸化水平也顯著提高，說明TFAs可以激活細(xì)胞中的炎癥通路，從

7、而促進(jìn)炎癥因子基因的表達(dá)。
　　3.脂筏結(jié)構(gòu)參與了TFAs引發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的過程。脂筏破壞劑MβCD在作用濃度為10mM時，處理50 min后脂筏的標(biāo)志蛋白（小窩蛋白）表達(dá)量有顯著下降，說明脂筏結(jié)構(gòu)被破壞。去除脂筏后，炎癥因子表達(dá)顯著降低，炎癥調(diào)節(jié)通路的激活也被抑制，說明破壞脂筏對炎癥有抑制作用。
　　4.脂筏結(jié)構(gòu)影響內(nèi)皮細(xì)胞炎癥受體的表達(dá)。9t18:1可以明顯增加HUVEC中炎癥受體TLR4蛋白的表達(dá)，去除脂筏后，TL