異亞丙基莽草酸對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞活化的影響及機(jī)理研究.pdf

1、研究分為六部分：1.異亞丙基莽草酸對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性及NO、PGl<,2>分泌的影響.目的：研究異亞丙基莽草酸（3，4-oxo-isopropylidene-shikimic acid,ISA）對(duì)體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）增殖活性及NO、PGI<,2>分泌的影響.方法：用噻唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)細(xì)胞活性;硝酸還原酶法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中NO

2、水平;放射免疫法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中前列環(huán)素代謝物6-酮-前列腺素F<,1α>(6-keto-PGF<,1α>)含量.2.異亞丙基莽草酸對(duì)H<,2>O<,2>損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用.目的：以H<,2>O<,2>誘導(dǎo)HUVEC損傷，研究ISA對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.方法：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活性;采用硝酸還原酶法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中NO水平;放射免疫法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中6-keto-PGF<,1α>含量;比

3、色法測(cè)定培養(yǎng)液及細(xì)胞裂解液的乳酸脫氫酶（LDH）活性并計(jì)算LDH的釋放率.結(jié)論：ISA對(duì)H<,2>O<,2>損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞具有保護(hù)作用.3.異亞丙基莽草酸對(duì)H<,2>O<,2>誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響.目的：研究ISA對(duì)H<,2>O<,2>誘導(dǎo)HUVEC凋亡的影響并探討其機(jī)制.方法：用AnnexinV-PI染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)法和原位未斷標(biāo)記法（TUNEL）檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá).結(jié)論：ISA

4、對(duì)H<,2>O<,2>誘導(dǎo)HUVEC凋亡有明顯的抑制作用，其機(jī)理與上調(diào)凋亡抑制基因Bcl-2無(wú)關(guān).4.異亞丙基莽草酸的抗氧化作用研究.目的：研究ISA的體外抗氧化作用.方法：采用體外自由基捕捉實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ISA對(duì)超氧陰離子和羥自由基的清除率;采用硫代巴比妥酸微量法測(cè)定丙二醛;黃嘌呤氧化酶法測(cè)總超氧化物岐化酶（SOD）;可見(jiàn)光法測(cè)過(guò)氧化氫酶（CAT）.結(jié)論：ISA具有體外抗氧化作用，對(duì)抗氧化酶SOD和CAT的活性無(wú)直接影響.5.異亞丙基莽草酸

5、對(duì)H<,2>O<,2>激活內(nèi)皮細(xì)胞與中性粒細(xì)胞黏附及內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)的影響.目的：觀察H<,2>O<,2>激活內(nèi)皮細(xì)胞與中性粒細(xì)胞（PMN）黏附的作用，H<,2>O<,2>對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)的影響及ISA的干預(yù)作用.方法：采用孟加拉玫紅染色法研究PMN與HUVEC黏附;cell-ELISA法研究HUVEC黏附分子的表達(dá);RT-PCR法研究細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）的mRNA表達(dá).結(jié)論：H<,2>O<,2>可誘導(dǎo)HUVEC

6、與PMN黏附，并增加ICAM-1的表達(dá);ISA可抑制H<,2>O<,2>激活內(nèi)皮細(xì)胞與中性粒細(xì)胞黏附，其機(jī)制與抑制ICAM-1的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)有關(guān).6.異亞丙基莽草酸對(duì)白細(xì)胞與TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞黏附的影響.目的：觀察ISA對(duì)白細(xì)胞與TNF-α誘導(dǎo)的HUVEC黏附的抑制作用并探討其作用機(jī)制.方法：孟加拉玫紅染色法研究PMN與HUVEC黏附;MTT比色法研究單核細(xì)胞與HUVEC的黏附;Cell-ELISA研究HUVEC黏附分子IC

7、AM-1、VCAM-1、E-選擇素的表達(dá);RT-PCR法研究ICAM-1和VCAM-1的mRNA表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子-κB的核移位.結(jié)論：ISA抑制TNF-α誘導(dǎo)HUVEC與白細(xì)胞黏附，其作用機(jī)制與ISA抑制ICAM-1、E-選擇素和VCAM-1的表達(dá)有關(guān).綜上所述，異亞丙基莽草酸可促進(jìn)HUVEC釋放前列環(huán)素;對(duì)H<,2>O<,2>引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和凋亡具有保護(hù)作用.ISA可抑制內(nèi)皮細(xì)胞與白細(xì)胞的黏附，并抑制黏附分子