家族性高膽固醇血癥患者新致病基因篩查及可溶性環(huán)氧化物水解酶基因突變體對細(xì)胞LDLR功能的影響.pdf

1、目的：
　　對我國家族性高膽固醇血癥（FH）患者進(jìn)行新致病基因的篩查并探討其基因型與臨床表型之間的關(guān)系。
　　方法：
　?、俑鶕?jù)我國FH臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，對7例臨床確診的先證者及其核心家系進(jìn)行病史詢問，問卷調(diào)查，生化檢查并采集外周靜脈血；
　?、诓捎冒邢蛲怙@子芯片結(jié)合二代測序?qū)?例FH先證者進(jìn)行基因型分析；
　?、鄯治龌颊呤欠翊嬖诘兔芏戎鞍资荏w（LDLR）、載脂蛋白B100（APOB100）及前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草

2、溶菌素9（PCSK9）三個已知致病基因突變；
　?、芊治鋈齻€已知致病基因突變陰性先證者及其核心家系的臨床特點(diǎn)；
　?、菀淮鷾y序驗(yàn)證突變陰性先證者及其核心家系的基因型。
　　結(jié)果：
　?、?例FH先證者皮膚，肌腱等部位多發(fā)黃色瘤，血漿膽固醇（TC）大幅增高（10.98～22.62 mmol/L）；
　　②發(fā)現(xiàn)一例純合低密度脂蛋白受體（LDLR）缺失突變c.632～634delACT，四例LDLR雜合錯義突變分

3、別為H562Y、P664L、C711Y，818-2A/G，一例LDLR終止突變W462X，另有一例患者未篩查到已知致病基因突變，但攜帶可溶性環(huán)氧化物水解酶（EPHX2）基因突變位點(diǎn)R287Q；
　?、弁蛔冴幮韵茸C者的TC為17.06 mmol/L，其父母親TC比先證者低但高于正常人，分別為10.62 mmol/L，5.23 mmol/L；
　?、芤淮鷾y序結(jié)果表明突變陰性的先證者及核心家系均攜帶有相同的EPHX2基因突變位點(diǎn)R

4、287Q。
　　結(jié)論：
　　FH先證者發(fā)病年齡較早，膽固醇大幅增高，皮膚，手腕等部位多發(fā)黃色瘤；多數(shù)先證者基因發(fā)生突變，其中LDLR突變頻率最高；發(fā)現(xiàn)1名FH先證者攜帶的EPHX2基因突變位點(diǎn)可能為新致病基因突變。
　　目的：
　　探討FH可能的新致病基因可溶性環(huán)氧化物水解酶基因突變體R287Q對細(xì)胞LDLR功能的影響。
　　方法：
　?、俑鶕?jù)野生型質(zhì)粒WT，構(gòu)建突變型質(zhì)粒R287Q并一代測序驗(yàn)證，體

5、外轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞；
　　②采用Western blot檢測EPHX2蛋白的表達(dá)；
　?、鄄捎每扇苄原h(huán)氧化物水解酶活性試劑盒檢測EPHX2的酶活性；
　?、懿捎昧魇椒治鰞x檢測EPHX2突變體R287Q對LDLR結(jié)合能力影響；
　　⑤采用流式分析儀檢測EPHX2突變體R287Q對LDLR內(nèi)吞能力影響。
　　結(jié)果：
　　①測序結(jié)果表明野生型WT及突變型R287Q質(zhì)粒序列正確表明成功構(gòu)建；
　　②W

6、estern blot觀察野生型WT及突變型質(zhì)粒R287Q轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞中EPHX2蛋白均成功表達(dá)；
　?、劭扇苄原h(huán)氧化物水解酶活性測定發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染R287Q質(zhì)粒的可溶性環(huán)氧化物水解酶活性較WT質(zhì)粒顯著下降；
　?、芰魇椒治鼋Y(jié)果顯示EPHX2突變體R287Q顯著降低LDLR的結(jié)合能力；
　　⑤流式分析結(jié)果顯示相比于WT，EPHX2突變體R287Q顯著降低LDLR的內(nèi)吞能力。
　　結(jié)論：
　　EPHX2基因突