2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本文分為兩部分: 第一部分:應(yīng)用酵母雙雜交和哺乳動物雙雜交的方法,研究野生型雙鏈特異型RNA腺苷脫氨基酶ADARl蛋白(ADAR1<'WT>)與一個中國DSH家系中的錯義突變產(chǎn)生的突變體R916W(ADAR1<'R96W>)之間的相互作用,從而探討ADAR1基因錯義突變在遺傳性對稱性色素異常癥中的分子致病機(jī)制。 研究方法: 通過RT-PCR方法從患者外周血白細(xì)胞中獲得含ADARl基因R916W突變的全長cDNA,

2、將野生型和突變型全長cDNA分別克隆到相關(guān)質(zhì)粒載體上,利用Matchmake<'TM>GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)3和CheckMate<'TM>哺乳動物雙雜交系分別在酵母和HeLa細(xì)胞中檢測蛋白單體間的相互作用。 研究結(jié)果: 發(fā)現(xiàn)在酵母細(xì)胞中,外源基因不能正確表達(dá),未能檢測到野生型-野生型ADAR1蛋白及野生型.突變體ADAR1蛋白間的相互作用;在哺乳動物雙雜交系統(tǒng)中,與對照細(xì)胞相比,pBIND-ADAR1<'TM>和pAC

3、T-ADAR1<'WT>共轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞中熒光素相對活性顯著升高(P<0.05);與共轉(zhuǎn)染pBIND-ADARl<'WT>和pACT-ADAR1<'WT>的HeLa細(xì)胞比較,pBIND-ADAR1<'R916W>和pACT-ADAR1<'WT>共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中熒光素相對活性明顯降低(P<0.05),為前者的66%。 研究結(jié)論: 通過分子生物學(xué)的方法,在哺乳動物細(xì)胞中檢測到ADAR1<'WT>自身相互作用,并且首次闡明了

4、ADAR1<'WT>和ADAR1<'R916W>突變體蛋白相互作用存在,但作用強(qiáng)度明顯減弱。 第二部分:對一中國Marie Unna遺傳性少毛癥家系,運(yùn)用生物信息學(xué)的方法,在基因組上選取微衛(wèi)星標(biāo)記,應(yīng)用兩點(diǎn)連鎖分析,對該病的致病基因進(jìn)行精細(xì)定位。依據(jù)基因組的定位范圍,選取候選基因,并篩查出該病的致病基因。 研究方法: 采用覆蓋8p21的4個微衛(wèi)星標(biāo)記對家系進(jìn)行局部基因組定位,利用Linkage軟件(MLink)進(jìn)

5、行連鎖和單倍型分析,計算出LOD值。通過PCR和測序的方法,對候選基因HR和RAI16的所有外顯子進(jìn)行擴(kuò)增和測序。對測序發(fā)現(xiàn)的突變,應(yīng)用酶切的方法對家系所有成員以及80個正常人進(jìn)行突變鑒定。結(jié)果顯示,當(dāng)MUHH呈常染色體顯性模式遺傳、外顯率為99.9%時,在8號染色體上微衛(wèi)星標(biāo)記。D8S1733處獲得的LOD值為3.14(0=0.00)。對候選基因HR和RA116的所有外顯子進(jìn)行PCR測序。 研究結(jié)果: 結(jié)果顯示,在RA

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