版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、本文分為兩部分: 第一部分:應(yīng)用酵母雙雜交和哺乳動物雙雜交的方法,研究野生型雙鏈特異型RNA腺苷脫氨基酶ADARl蛋白(ADAR1<'WT>)與一個中國DSH家系中的錯義突變產(chǎn)生的突變體R916W(ADAR1<'R96W>)之間的相互作用,從而探討ADAR1基因錯義突變在遺傳性對稱性色素異常癥中的分子致病機(jī)制。 研究方法: 通過RT-PCR方法從患者外周血白細(xì)胞中獲得含ADARl基因R916W突變的全長cDNA,
2、將野生型和突變型全長cDNA分別克隆到相關(guān)質(zhì)粒載體上,利用Matchmake<'TM>GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)3和CheckMate<'TM>哺乳動物雙雜交系分別在酵母和HeLa細(xì)胞中檢測蛋白單體間的相互作用。 研究結(jié)果: 發(fā)現(xiàn)在酵母細(xì)胞中,外源基因不能正確表達(dá),未能檢測到野生型-野生型ADAR1蛋白及野生型.突變體ADAR1蛋白間的相互作用;在哺乳動物雙雜交系統(tǒng)中,與對照細(xì)胞相比,pBIND-ADAR1<'TM>和pAC
3、T-ADAR1<'WT>共轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞中熒光素相對活性顯著升高(P<0.05);與共轉(zhuǎn)染pBIND-ADARl<'WT>和pACT-ADAR1<'WT>的HeLa細(xì)胞比較,pBIND-ADAR1<'R916W>和pACT-ADAR1<'WT>共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中熒光素相對活性明顯降低(P<0.05),為前者的66%。 研究結(jié)論: 通過分子生物學(xué)的方法,在哺乳動物細(xì)胞中檢測到ADAR1<'WT>自身相互作用,并且首次闡明了
4、ADAR1<'WT>和ADAR1<'R916W>突變體蛋白相互作用存在,但作用強(qiáng)度明顯減弱。 第二部分:對一中國Marie Unna遺傳性少毛癥家系,運(yùn)用生物信息學(xué)的方法,在基因組上選取微衛(wèi)星標(biāo)記,應(yīng)用兩點(diǎn)連鎖分析,對該病的致病基因進(jìn)行精細(xì)定位。依據(jù)基因組的定位范圍,選取候選基因,并篩查出該病的致病基因。 研究方法: 采用覆蓋8p21的4個微衛(wèi)星標(biāo)記對家系進(jìn)行局部基因組定位,利用Linkage軟件(MLink)進(jìn)
5、行連鎖和單倍型分析,計算出LOD值。通過PCR和測序的方法,對候選基因HR和RAI16的所有外顯子進(jìn)行擴(kuò)增和測序。對測序發(fā)現(xiàn)的突變,應(yīng)用酶切的方法對家系所有成員以及80個正常人進(jìn)行突變鑒定。結(jié)果顯示,當(dāng)MUHH呈常染色體顯性模式遺傳、外顯率為99.9%時,在8號染色體上微衛(wèi)星標(biāo)記。D8S1733處獲得的LOD值為3.14(0=0.00)。對候選基因HR和RA116的所有外顯子進(jìn)行PCR測序。 研究結(jié)果: 結(jié)果顯示,在RA
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 遺傳性對稱性色素異常癥致病基因的定位和突變研究.pdf
- 遺傳性對稱性色素異常癥基因精細(xì)定位和ADAR基因突變檢測.pdf
- 遺傳性對稱性色素異常癥基因新突變的發(fā)現(xiàn).pdf
- 遺傳性對稱性色素異常癥ADAR1基因突變檢測.pdf
- 遺傳性對稱性色素異常癥家系A(chǔ)DAR1基因突變研究.pdf
- Marie Unna型遺傳性稀毛癥致病基因突變篩查及功能研究.pdf
- 遺傳性板層白內(nèi)障致病基因的定位與突變篩查.pdf
- 單基因遺傳性高血壓致病基因突變研究.pdf
- 遺傳性對稱性色素異常癥——一家系調(diào)查和致病基因的研究.pdf
- 全基因組掃描定位遺傳性對稱性色素異常癥易感區(qū)域.pdf
- 遺傳性白內(nèi)障致病基因的定位與突變研究.pdf
- 遺傳性泛發(fā)性色素異常癥一家系致病基因的定位分析.pdf
- 遺傳性色素性皮膚病基因突變及相關(guān)致病機(jī)理的研究.pdf
- 遺傳性白內(nèi)障致病基因的定位及其突變分析.pdf
- 遺傳性對稱性色素異常癥和雀斑的臨床特點(diǎn)和遺傳方式研究.pdf
- 兩種遺傳性眼病致病基因的定位與突變研究.pdf
- 一遺傳性單純少毛癥家系的基因定位.pdf
- 遺傳性耳聾基因突變的研究.pdf
- 線粒體基因突變與遺傳性耳聾.pdf
- 遺傳性全白甲致病基因初步定位及角蛋白17基因突變研究.pdf
評論
0/150
提交評論