一株產(chǎn)凝乳酶枯草芽孢桿菌的篩選鑒定及N+注入選育.pdf

1、干酪生產(chǎn)中應(yīng)用的凝乳酶主要有三類,包括動物凝乳酶、植物凝乳酶和微生物凝乳酶,評價凝乳酶優(yōu)劣的兩個重要指標是凝乳活力和蛋白水解力。近年來,由于世界干酪產(chǎn)量逐年上升,對凝乳酶的需求也不斷增大,因此,來源廣泛、價格低廉的微生物凝乳酶日益受到人們的重視。
　　目前產(chǎn)凝乳酶菌株的誘變選育的研究大多集中在霉菌,對細菌的研究報道較少。本研究以市售干酪為原料,從中分離出一株產(chǎn)凝乳酶的菌株,采用生理生化特征分析和16SrDNA序列分析的方法對菌株進

2、行鑒定,在此基礎(chǔ)之上采用低能氮離子束注入法對該菌株進行誘變,探究離子注入誘變技術(shù)選育高產(chǎn)凝乳酶菌株的可行性,并對誘變菌株的發(fā)酵條件及其酶活性進行了初步研究。
　　實驗一:從市售美蘭干酪中分離篩選,得到一株產(chǎn)凝乳酶活性良好的菌株,其凝乳活力750SU/mL,蛋白水解活力1.86U/mL的菌株,其凝乳活力和蛋白水解活力比值為403.23,凝乳效果及氣味良好;凝乳質(zhì)地光滑,硬度適中;呈乳黃色,均勻有光澤。
　　實驗二:運用形態(tài)學觀

3、察、常規(guī)生理生化鑒定和16SrDNA鑒定的方法,通過構(gòu)建菌株系統(tǒng)進化樹,鑒定該菌株為一株枯草芽孢桿菌。
　　實驗三:采用N+注入法對篩選出的菌株進行誘變,確定最佳誘變條件為能量20keV、劑量2.08×1015ions/cm2,獲得一株特性優(yōu)良的誘變菌株XCYB-6,其凝乳活力達到2181.82SU/mL,比出發(fā)菌株提高1.9倍,蛋白水解活力為2.53U/mL,凝乳活力與蛋白水解活力的比值高達862.38。傳代(6代)實驗表明,誘

4、變菌株具有良好的遺傳穩(wěn)定性。
　　實驗四:在單因素發(fā)酵試驗基礎(chǔ)之上進行旋轉(zhuǎn)正交試驗,建立凝乳酶生產(chǎn)發(fā)酵工藝中葡萄糖濃度、牛肉膏濃度、裝液量和接種量對凝乳酶活性的數(shù)學模型。獲得優(yōu)化發(fā)酵條件為:葡萄糖濃度15g/L,牛肉膏濃度5.0g/L,裝液量50mL,接種量3.5％,凝乳酶活實際可達到3055SU/mL。
　　實驗五:通過酶活性試驗研究表明該凝乳酶在酸性條件下具有較高的酶活,pH在5.5時酶活性最高;45℃為該凝乳酶的最適凝