沉積微桿菌TPS-TPP基因的克隆、表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、海藻糖分子是由兩個(gè)葡糖基以α-1,1糖苷鍵連接而成,具有優(yōu)良的生物學(xué)性能和食品加工性能,其被廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)等領(lǐng)域。本實(shí)驗(yàn)中,我們對(duì)耐壓耐冷沉積微桿菌 Microbacterium sediminis YLB-01的重組6-磷酸海藻糖合成酶(msTPS)和6-磷酸海藻糖磷酸酯酶(msTPP)的性質(zhì)進(jìn)行了一系列的研究。msTPS和 msTPP預(yù)測(cè)分子量分別為55.15kDa和28.59kDa,理論等電點(diǎn)分別為5.89和4.59。

2、  我們首先以 Microbacterium sediminis YLB-01的TPS和 TPP編碼基因?yàn)橐罁?jù),分別克隆目的基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒并將其導(dǎo)入到表達(dá)宿主菌體內(nèi)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),然后通過(guò) Ni2+親和層析、透析及超濾獲得較純濃縮蛋白收集液,最后通過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)做了探究。研究表明:⑴重組msTPS最適反應(yīng)溫度和pH分別為40℃和7.5,4℃時(shí)依然具有較高的活性,熱穩(wěn)定性較差,Mg2+、Co2+或 Ba2+能極大的促進(jìn)其活性,M

3、n2+、Zn2+、Ca2+和 Hg2+對(duì)活性沒(méi)有影響,在本實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)6-磷酸葡萄糖和尿苷二磷酸葡萄糖的Km值分別為1.38mM和1.53mM,最大反應(yīng)速度 Vmax為62.5 U/min?mg。⑵重組 msTPP酶最適反應(yīng)溫度和pH分別為30℃和7.5,熱穩(wěn)定性也較差,Mg2+存在的條件下活性達(dá)到最高,Co2+或 Ba2+對(duì)活性有較大的促進(jìn)作用,Mn2+、Zn2+、Ca2+對(duì)重組酶活性沒(méi)有影響,在本實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)6-磷酸海藻糖的Km為2

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