結(jié)核分枝桿菌H37Rv組氨醇脫氫酶基因的克隆、表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)分析.pdf

1、結(jié)核病是人類健康的大敵，每年導(dǎo)致約300萬(wàn)人死亡，同時(shí)全球有將近三分之一的人口(20億)受到結(jié)核分枝桿菌的感染。由于耐藥菌株的出現(xiàn)，在治療結(jié)核病時(shí)，人類將面臨無(wú)藥可用的危險(xiǎn)處境。2006年9月，世界衛(wèi)生組織發(fā)出警示：對(duì)目前所有藥物耐受的廣泛耐藥結(jié)核桿菌已經(jīng)出現(xiàn)。鑒于此，新型抗結(jié)核藥物的研發(fā)迫在眉睫。 基于藥物靶標(biāo)的新藥開(kāi)發(fā)是目前廣為采用的新藥開(kāi)發(fā)策略。利用這種策略開(kāi)發(fā)新藥，需要識(shí)別可作為藥物靶標(biāo)的蛋白，并獲得該蛋白的三維結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)

2、，再利用從頭設(shè)計(jì)或者虛擬篩選獲得具有抑制作用的先導(dǎo)化合物。 以潛伏狀態(tài)在宿主體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間持留，是結(jié)核分枝桿菌致病的重要特性，也是結(jié)核病治療周期長(zhǎng)的原因之一。目前大多數(shù)藥物僅對(duì)生長(zhǎng)期的結(jié)核桿菌有效，因此，開(kāi)發(fā)針對(duì)潛伏期結(jié)核桿菌的新型抗結(jié)核藥物意義重大。 我們以結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組為模板，擴(kuò)增hisD基因，構(gòu)建pET-28a-HDH重組質(zhì)粒；轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒到Ecoli BL21(DE3)并誘導(dǎo)表達(dá)，純化可溶性的結(jié)核分枝桿

3、菌L-組氨醇脫氫酶(HDH)，并對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行研究，結(jié)果表明：重組結(jié)核分枝桿菌L．組氨醇脫氫酶能以L-組氨醇和NAD<'+>為底物催化L-組氨醇生成L-組氨酸；該酶的最適pH值為8.3，最適溫度為45℃，比活力為1.788 L1/mg；Mn<'2+>、Ca<'2+>、Zn<'2+>、CO<'2+>等對(duì)酶促反應(yīng)有激活作用；底物NAD<'+>和L-組氨醇的米氏常數(shù)分別為0.9765 mmol/L和2.755μmol/L；25℃時(shí)重組蛋白的二級(jí)