大豆球蛋白堿性抗菌肽的富集、抗菌及其應(yīng)用效果的研究.pdf

1、本課題以低溫脫脂豆粕粉為原料，首先利用等電點(diǎn)沉淀法提取大豆球蛋白堿性抗菌肽（GBAP），利用葡聚糖凝膠G-50層析柱純化GBAP，再用微生物膜吸附法富集GBAP。研究富集的GBAP對大腸桿菌（E. coli）的抑菌活性和其對E. coli細(xì)胞膜通透性及細(xì)胞形態(tài)的影響。此外，研究富集的GBAP對冷鮮肉的感官特性和理化特性的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　(1)根據(jù)等電點(diǎn)沉淀原理，從低溫脫脂豆粕粉中分離提取大豆球蛋白，之后利用β-巰基乙醇使

2、連接大豆球蛋白酸性多肽和堿性多肽的二硫鍵斷開，根據(jù)酸性多肽和堿性多肽等電點(diǎn)的不同分離提取 GBAP。采用葡聚糖凝膠 G-50層析柱純化GBAP，可得到純度約為80％的GBAP。之后采用微生物膜吸附法進(jìn)一步富集得到純度達(dá)95%以上的GBAP，說明此方法可很好的富集GBAP。
　　(2)通過牛津杯試驗(yàn)、分光光度法測定富集的GBAP對E. coli的最小抑菌濃度，利用菌落計(jì)數(shù)法對E. coli進(jìn)行抑菌動(dòng)力學(xué)研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：富集的GB

3、AP的最小抑菌濃度為400μɡ/ml。并且富集的GBAP對E. coli的抑菌效果隨著濃度和作用時(shí)間的增加而增強(qiáng)。
　　(3)通過結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)，電導(dǎo)率測定及離子泄漏分析考察富集的GBAP對E. coli細(xì)胞膜通透性的影響。通過結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)可知，隨著 GBAP濃度的增大，OD590也隨之增大。通過電導(dǎo)率測定及離子泄露分析可知，隨著處理時(shí)間的增長，電導(dǎo)率隨之增大，離子泄漏隨之增多，說明富集的GBAP可以作用于E. coli的細(xì)胞膜，能夠改

4、變其通透性。通過原子力顯微鏡分析GBAP對E. coli細(xì)胞形態(tài)的改變，顯微照片顯示GBAP可引起細(xì)胞表面局部形態(tài)，并形成細(xì)槽，孔洞，最終細(xì)胞塌陷。
　　(4)對經(jīng)GBAP處理的冷鮮肉的感官特性（色澤、氣味和組織狀態(tài)）進(jìn)行測評，與對照組相比，隨著 GBAP濃度的增大，冷鮮肉能夠保持良好感官特性的時(shí)間也增長。方差分析顯示0.16%和0.2%的GBAP能較長時(shí)間的保持冷鮮肉的良好感官特性，其中0.2%的GBAP能更好的保持冷鮮肉的感官

5、特性，能夠?qū)⑵浔３衷谳^好感官特性達(dá)8天。
　　(5)在GBAP對冷鮮肉微生物指標(biāo)及理化性質(zhì)的研究中，與對照組相比，隨著GBAP濃度的增加，其對冷鮮肉的微生物指標(biāo)（菌落總數(shù)）、理化指標(biāo)（pH值、揮發(fā)性鹽基氮及高鐵肌紅蛋白含量）產(chǎn)生顯著性影響，但 GBAP對硫代巴比妥酸值無影響，說明不具有抗脂肪氧化作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，0.16%和0.2%的GBAP對冷鮮肉中微生物的生長繁殖有明顯的抑制效果，可減緩冷鮮肉中蛋白質(zhì)的降解速度，并延緩冷鮮