大環(huán)多胺修飾的聚氨基酸衍生物的合成與活性的研究.pdf

1、基因治療在從根本上解決某些人類重要疾病方面擁有著巨大的潛力，而基因轉(zhuǎn)移至人體的過(guò)程中需要載體來(lái)協(xié)助將其送達(dá)至目標(biāo)細(xì)胞，因此高效低毒、可生物降解的基因載體成為研究開(kāi)發(fā)新型基因載體的目標(biāo)。目前總的看來(lái)，非病毒載體，尤其是陽(yáng)離子聚合物，在該領(lǐng)域受到越來(lái)越多的關(guān)注，有著良好的發(fā)展前景。本課題主要工作如下:
　　 首先，我們選擇兩種廉價(jià)易得、無(wú)毒的L-天冬氨酸(L-ASP)和L-賴氨酸(L-LYS)為原料，通過(guò)熱縮聚的方法得到聚（琥珀酰亞

2、胺-賴氨酸），(P(SI-co-LYS)）。然后水解得到兩性聚電解質(zhì)——天冬氨酸-賴氨酸共聚物(P(ASP-co-LYS))。由于本文的目的在于合成出一種高效低毒的新型基因載體，因此，將帶有大量正電荷的大環(huán)多胺接枝到P(SI-co-LYS)上，水解得到不同接枝率的陽(yáng)離子聚合物——接枝環(huán)多胺的天冬氨酸-賴氨酸共聚物(P[ASP(cyclen)-co-LYS])。通過(guò)NMR、FT-IR、GPC等手段進(jìn)行表征確認(rèn)。合成出的的接枝環(huán)多胺的天冬氨

3、酸-賴氨酸共聚物可生物降解，具備基因載體所要求的無(wú)毒可降解的理化性質(zhì)。
　　 其次，為了探究P[ASP(cyclen)-co-LYS]作為基因載體的可能性，我們對(duì)其生物性能進(jìn)行研究。主要通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳、熒光淬滅、圓二色譜研究其與DNA的結(jié)合能力及對(duì)DNA的保護(hù)作用，應(yīng)用Zeta電位和粒徑分析、AFM觀察P[ASP(cyclen)-co-LYS]/DNA復(fù)合物的粒徑及結(jié)合后的形態(tài)，并通過(guò)MTT法研究了其細(xì)胞毒性。一系列測(cè)試結(jié)果

4、表明，P[ASP(cyclen)-co-LYS]與DNA結(jié)合能力良好，并可與質(zhì)粒DNA形成復(fù)合物，保護(hù)DNA不被脫氧核糖核酸酶降解，且復(fù)合物具有合適的粒徑和表面電荷，容易被細(xì)胞攝取。此外，MTT結(jié)果顯示，和25 kDa PEI相比，P[ASP(cyclen)-co-LYS]具有較低的細(xì)胞毒性。這些結(jié)果說(shuō)明，P[ASP(cyclen)-co-LYS]有作為一種新型的基因載體來(lái)使用的潛力。
　　 本課題對(duì)P[ASP(cyclen)-