Lipstatin發(fā)酵工藝優(yōu)化研究.pdf

1、Lipstatin是毒三素鏈霉菌的次級代謝產(chǎn)物，是一種有效的胰脂肪酶抑制劑，專一性強，只對胃腸道系統(tǒng)起作用。Lipstatin的氫化產(chǎn)物Orlistat（奧利司他）是一種重要的預防和治療與肥胖相關的疾病的藥物，副作用小，并對神經(jīng)中樞系統(tǒng)無作用，是近10年來減肥藥物市場上主要的減肥藥物。本文在本實驗室前期研究的基礎上，對Lipstatin的發(fā)酵工藝進行了優(yōu)化研究。
　　首先進行了培養(yǎng)基的優(yōu)化研究，依據(jù)本實驗室前期的單因素實驗研究結果

2、，對Lipstatin的發(fā)酵培養(yǎng)基進行了正交實驗，優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基，確定的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：亞油酸3.0％，黃豆粉6.0%，甘油2.0%，卵磷脂1.0%，與優(yōu)化前相比，發(fā)酵單位提高了17.1%。研究了無機鹽對Lipstatin發(fā)酵效價的影響，結果表明：當培養(yǎng)基中K2HPO4濃度為0.09%，MgSO4濃度為0.01%時，Lipstatin發(fā)酵效價提高了2.3%。研究了不同消沫劑對Lipstatin發(fā)酵的影響，研究發(fā)現(xiàn)使用SAG消沫效

3、果最好。對于泡沫過大的罐批，加入豆油消沫，可適當提高Lipstatin的發(fā)酵效價。
　　在以上優(yōu)化培養(yǎng)基的基礎上，結合本實驗室前期的單因素試驗研究成果，在10L的發(fā)酵罐中，用正交實驗法對Lipstatin的發(fā)酵工藝條件進行了優(yōu)化，確定最佳的工藝條件為：溫度27℃，接種量9%，種齡30h，發(fā)酵液pH7.0。此外還對發(fā)酵過程中攪拌轉速、通氣量、培養(yǎng)基的裝量進行了優(yōu)化，結果表明當發(fā)酵罐培養(yǎng)基裝量6.0L，轉速260rpm，通氣量0.8v

4、vm時最有利于Lipstatin的生物合成。在此基礎上對Lipstatin的發(fā)酵過程進行了變溫培養(yǎng)研究，在接種后維持溫度27℃，在36h后調整溫度為25℃，與恒溫培養(yǎng)相比，Lipstatin發(fā)酵效價提高了3.5%。
　　采用優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)基配方及發(fā)酵工藝條件，對Lipstatin的發(fā)酵過程進行亞油酸/辛酸補料、L-亮氨酸和豆油的補料研究，發(fā)現(xiàn)補料方式對 Lipstatin的生物合成有重要的影響，確定最佳的補料工藝為：在接種36小時