產(chǎn)朊假絲酵母高產(chǎn)谷胱甘肽及富硒工藝研究.pdf

1、谷胱甘肽具有重要的生理活性,對(duì)于腫瘤、癌癥、抗衰老和內(nèi)分泌失調(diào)的治療有較明顯的作用,廣泛應(yīng)用于在醫(yī)藥、食品、飼料等行業(yè);硒對(duì)于人體有著維持人體正常生命活動(dòng)的作用,缺硒會(huì)導(dǎo)致克山病、肝壞死、癌癥等多種疾病的發(fā)生,硒主要以無(wú)機(jī)硒和有機(jī)硒的形式存在于自然界中,無(wú)機(jī)硒毒性較高,有機(jī)硒具有生物活性強(qiáng)、吸收率高、毒性低、環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)。通過微生物發(fā)酵合成谷胱甘肽和硒的轉(zhuǎn)化是目前最經(jīng)濟(jì)、安全、實(shí)用的方法。
　　本試驗(yàn)研究的內(nèi)容及結(jié)論如下所示:

2、
　　(1)研究了新銅試劑法測(cè)定酵母提取液中GSH含量的可行性,考察HPLC和新銅試劑法測(cè)定酵母提取中GSH含量。對(duì)2種方法所測(cè)得結(jié)果做了比較,結(jié)果表明:HPLC法測(cè)定,準(zhǔn)確度、精密度、回收率、以及樣品的測(cè)定值均能達(dá)到較高水平;新銅試劑法測(cè)定,準(zhǔn)確度、回收率、以及樣品的測(cè)定結(jié)果接近于HPLC法;由于新銅試劑法不可排除共存的其他含巰基化合物的干擾,其精密度要明顯低于HPLC法。新銅試劑法適用于酵母提取液中GSH的測(cè)定,因酵母提取液中

3、共存的其他含巰基化合物較少,其優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單,檢測(cè)限低,測(cè)試成本較低,適用于大規(guī)模生產(chǎn)的分析測(cè)定。
　　(2)研究了培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件對(duì)產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵產(chǎn) GSH的影響,考察了胞內(nèi) GSH的抽提方法、培養(yǎng)基組成及補(bǔ)加葡萄糖對(duì) GSH產(chǎn)量的影響。結(jié)果顯示:最佳的抽提方法為乙醇法;酵母粉與硫酸銨對(duì)胞內(nèi)谷胱甘肽含量影響最大,以硫酸銨為氮源時(shí) GSH含量可達(dá)到25.48mg/g;補(bǔ)加葡萄糖的時(shí)間為接種后10h、補(bǔ)加量為16mL。最佳條件下得

4、到菌體干重為8.14g/L,通過搖瓶發(fā)酵GSH產(chǎn)量為113.45mg/L,GSH產(chǎn)量提高了2.89倍。
　　(3)研究了平板培養(yǎng)基中亞硒酸鈉濃度對(duì)產(chǎn)朊假絲酵母菌株富硒能力的誘變情況。當(dāng)平板培養(yǎng)基中添加亞硒酸鈉時(shí),菌株的顏色會(huì)變成紅色,亞硒酸鈉濃度越高顏色越深;在亞硒酸鈉濃度超過1500mg/L時(shí)菌株的富硒能力達(dá)到最強(qiáng),誘變后菌種富硒量是誘變前的5.6倍;利用選育的菌株進(jìn)行實(shí)驗(yàn),觀察菌株數(shù)量與亞硒酸鈉濃度的關(guān)系,結(jié)果表明產(chǎn)朊假絲酵母

5、對(duì)亞硒酸鈉的耐受力是有限的,當(dāng)濃度超過50mg/L就會(huì)抑制菌體的生長(zhǎng)。
　　(4)研究了發(fā)酵條件對(duì)產(chǎn)朊假絲酵母富硒量的影響。通過單因素的篩選,對(duì)酵母富硒量影響較大的三個(gè)因素為:亞硒酸鈉濃度、初始pH及培養(yǎng)溫度,以胞內(nèi)總硒含量為響應(yīng)值,利用響應(yīng)面法對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果顯示:在培養(yǎng)時(shí)間30h、加硒時(shí)間對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期、亞硒酸鈉濃度35mg/L,初始pH6.6、接種量10％、培養(yǎng)溫度27℃、裝液量150mL/500mL的條件下,得到的菌體生物