移動反應(yīng)界面滴定食品中蛋白總含量的新原理和新方法.pdf

1、關(guān)于食品中蛋白含量的測定已經(jīng)有較多研究。目前食品中蛋白含量的測定方法大多都存在操作程序復(fù)雜、測定時間長、無法排除非蛋白氮的影響等問題。本論文在移動反應(yīng)界面(Moving Reaction Boundary，MRB)的基礎(chǔ)上提出了一種用于測定食品中總蛋白含量的新方法—移動反應(yīng)界面滴定(Moving ReactionBoundary Titration，MRBT)，對嬰兒奶粉和豆?jié){中的總蛋白進(jìn)行了測定。實(shí)驗(yàn)證明該方法測定速度快，精確度高，而

2、且測定結(jié)果幾乎不受非蛋白氮的影響。
　　 具體研究內(nèi)容如下:
　　 1、移動反應(yīng)界面滴定法測定蛋白方法的建立
　　 在本論文的第二章中，在MRB的基礎(chǔ)上，利用OH-和蛋白質(zhì)上游離酸性殘基反應(yīng)的原理，提出了MRBT堿滴定蛋白質(zhì)，測定液體樣品中總蛋白含量的方法。并利用實(shí)驗(yàn)證明了以下幾點(diǎn):(1)蛋白被完全固定在聚丙烯酰胺膠中。(2)用H+和蛋白上的堿性殘基反應(yīng)或者用OH-和蛋白上的酸性殘基反應(yīng)也都可以進(jìn)行蛋白定量。(3

3、)蛋白質(zhì)以外的糖類、維生素等其它物質(zhì)與OH-不發(fā)生反應(yīng)，不會干擾樣品中總蛋白含量的測定;(4)電壓大小、背景電解質(zhì)(KCl)濃度以及NaOH濃度對界面移動速度都有較大影響。
　　 2、嬰兒奶粉中總蛋白含量的測定
　　 在本論文的第三章中，基于第二章設(shè)計(jì)的利用MRBT堿滴定蛋白質(zhì)的方法，我們對五種嬰兒奶粉中總蛋白含量進(jìn)行了測定，進(jìn)一步驗(yàn)證了MRBT法測定蛋白的可行性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:(1)在一定條件下，MRB在一定時間內(nèi)移動

4、的距離(D)和電泳時間(t)之間存在線性關(guān)系。(2) MRB的移動速度（VMRB）和樣品中總蛋白濃度間存在較好的線性關(guān)系，因此可以通過記錄MRB的移動距離，求得其移動速度，從而計(jì)算蛋白濃度。(3)加入三聚氰胺、尿素等非蛋白氮，用MRBT法測蛋白總含量不會受到非蛋白氮的影響。(4)將MRBT法和經(jīng)典凱氏定氮法比較，測同一樣品得到的總蛋白含量無顯著性差異。(5)在同一天內(nèi)重復(fù)三次實(shí)驗(yàn)，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.16％到7.41％之間。
　　

5、 3、豆?jié){中總蛋白含量的測定
　　 在本論文的第四章中，對四種豆?jié){的總蛋白含量進(jìn)行了測定，實(shí)驗(yàn)條件為第二章中經(jīng)實(shí)驗(yàn)得到的最有條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明:(1)在一定蛋白濃度下，MRB的移動距離(D)和反應(yīng)時間(t)呈線性關(guān)系。(2) VMRB和豆?jié){中總蛋白含量之間存在一定的函數(shù)關(guān)系，通過計(jì)算VMRB可以求出豆?jié){中蛋白總濃度。(3)三聚氰胺、尿素等非蛋白氮對MRBT法檢測豆?jié){中總蛋白含量基本沒有影響。(4)MRBT法的靈敏度與傳統(tǒng)凱氏定氮