三羥異黃酮通過激活PPAR調控UGTs表達的保肝機理研究.pdf

1、目的:大豆異黃酮是大豆等豆科植物在它們的生長過程中所產生的一類次級代謝產物,三羥異黃酮(Genistein,Gen)是大豆異黃酮的重要活性成分,具有多種生物學功能。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶(UGTs)是存在于人和動物肝臟中的一種重要的Ⅱ相代謝酶,能夠催化許多外源和內源化合物的代謝解毒。
　　本文通過細胞體外實驗來研究Gen對肝細胞的保護作用,以及Gen對UGTs活性的影響及其作用機理,研究過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)在

2、Gen誘導調控UGTs活性中的作用,為Gen保肝解毒及其對Ⅱ相代謝酶UGTs調控的機制提供依據(jù)。
　　方法:利用MTT法檢測不同劑量Gen及PPAR激活劑分別對對乙酰氨基酚(APAP)誘導的人正常肝細胞L-02及肝癌細胞HepG2、Hep3b活性的影響,研究Gen對正常肝細胞及癌細胞在APAP毒性誘導下的不同作用效果;利用高效液相色譜法研究 Gen、PPAR激活劑及抑制劑對 APAP在不同細胞內的代謝轉化情況的影響,通過測定細胞培

3、養(yǎng)液中APAP剩余量及細胞裂解液中葡萄糖醛酸化對乙酰氨基酚(APAP-GLu)生成量,對Gen及PPAR激活劑促進APAP代謝轉化、保肝解毒的作用進行評價;以4-NP為底物,分光光度法檢測Gen、PPAR激活劑及抑制劑分別對不同細胞 UGTs酶活性的影響;利用實時熒光定量 PCR法檢測Gen及PPAR激活劑對三種細胞中UGT1A1、 UGT1A6、UGT1A9、UGT1A10及孤兒核受體PPARα、PPARγ的mRNA表達的影響,同時采

4、用酶聯(lián)免疫吸附試驗對三種細胞中UGT1A、PPARα、PPARγ蛋白含量進行了測定,探究Gen調控UGTs活性的機理。
　　結果:(1)與空白對照組相比,Gen可以提高細胞對APAP毒性的抵抗能力,減輕APAP造成的損害;Gen處理或激活PPARs能夠提高APAP在細胞內的葡萄糖醛酸化作用,促進其代謝轉化;抑制PPARs的細胞環(huán)境不利于APAP的葡萄糖醛酸化反應;(2)Gen、PPARα激活劑、PPARγ激活劑能不同程度提高細胞U

5、GTs活性,而PPARα抑制劑、PPARγ抑制劑會降低UGTs活性,其中PPARγ激活劑與抑制劑作用效果較小;(3)Gen、PPARα激活劑、PPARγ激活劑能不同程度提高細胞UGT1A1、 UGT1A6、UGT1A9及孤兒核受體PPARα、PPARγmRNA表達,同時增加細胞UGT1A、PPARα及PPARγ蛋白含量。
　　結論:Gen對APAP引起的細胞損害有一定的改善作用,這可能與Gen經(jīng)由PPARs上調代謝APAP的主要I