黃酮通過(guò)激活DLC1抑制乳腺癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡的相關(guān)機(jī)理分析.pdf

1、乳腺癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤，我國(guó)女性乳腺癌患者臨床上的發(fā)病年齡一降再降，發(fā)病高峰年齡整體比西方婦女早15年，極大影響女性身心健康。在乳腺癌等惡性腫瘤中，DLC1具有抑制癌細(xì)胞增殖、遷移并誘導(dǎo)凋亡的作用。
　　人乳腺癌細(xì)胞MCF7是一種大而扁平的細(xì)胞，呈多邊形，健康狀態(tài)下細(xì)胞折光性好，生命周期較短，生命力旺盛，在本實(shí)驗(yàn)室條件下能夠培養(yǎng)成活，是研究乳腺癌細(xì)胞的良好材料。因此，本實(shí)驗(yàn)選用乳腺癌細(xì)胞MCF7作為研究對(duì)象。
　　黃酮類

2、化合物是存在于絕大多數(shù)植物體內(nèi)的一種次級(jí)代謝產(chǎn)物，由于它們具有抗炎癥、抗氧化、抗腫瘤等作用而受到廣泛關(guān)注。為了研究黃酮類化合物抑癌作用的分子機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)使用黃酮類化合物的核心結(jié)構(gòu):黃酮(flavone)處理人乳腺癌細(xì)胞MCF7，設(shè)計(jì)濃度梯度黃酮，用MTT實(shí)驗(yàn)確定最適黃酮濃度，進(jìn)一步應(yīng)用MTT方法檢測(cè)黃酮處理48h、72h及96h后細(xì)胞的增殖情況，用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)黃酮處理前后的細(xì)胞遷移情況，用平板克隆形成分析檢測(cè)黃酮對(duì)癌細(xì)胞克隆形成的影響，

3、用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)黃酮對(duì)細(xì)胞周期分布及凋亡的影響；用RT-PCR方法檢測(cè)黃酮處理后腫瘤抑制基因DLC1及細(xì)胞周期相關(guān)基因CyclinE和p21Waf1的表達(dá)。
　　通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)200μM黃酮能夠有效地抑制乳腺癌細(xì)胞增殖，為了進(jìn)一步研究抑制細(xì)胞增殖的機(jī)制，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)黃酮處理后的細(xì)胞周期分布情況，發(fā)現(xiàn)黃酮使細(xì)胞周期聚集在G0/G1期，阻止癌細(xì)胞向S期發(fā)展，并且一定程度地誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，進(jìn)而起到抑制細(xì)胞增殖的作用。應(yīng)用半定量R

4、T-PCR檢測(cè)黃酮處理后G1期周期蛋白CyclinE表達(dá)下調(diào)、周期蛋白依賴性的激酶抑制蛋白p21 Waf1表達(dá)上調(diào)，從而阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程，使細(xì)胞周期停滯在G0/G1期，而沒(méi)有向S期發(fā)展，抑制了細(xì)胞增殖，起到抑制癌癥發(fā)生、發(fā)展作用。應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)和平板克隆實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃酮可以有效地抑制細(xì)胞遷移和克隆形成，為了進(jìn)一步研究這種作用的機(jī)理，通過(guò)半定量RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)黃酮處理后抑癌基因DLC1表達(dá)上調(diào)，調(diào)控細(xì)胞遷移的ROCK基因表達(dá)下調(diào)，從而抑制了