三羥異黃酮調(diào)脂保肝機(jī)理研究.pdf

1、三羥異黃酮(Genistein，Gen)是大豆等豆科植物中的一種常見(jiàn)的次級(jí)代謝產(chǎn)物，其廣泛參與調(diào)控人體脂質(zhì)代謝、糖代謝、抗氧化等多種生理學(xué)活動(dòng)。以肝細(xì)胞脂肪變性、細(xì)胞內(nèi)脂肪過(guò)度沉積為主要特征的非酒精性脂肪肝病(NonaleoholieFatty Liver Disease，NAFLD)是現(xiàn)今最常見(jiàn)的應(yīng)激性肝損傷疾病之一。脂肪甘油三酯脂酶(Adipose Triglyceride Lipase，ATGL)是最新發(fā)現(xiàn)的脂肪分解的限速酶，其激

2、活途徑與其他脂肪酶多有不同。
　　目的:利用體外細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料建立細(xì)胞脂肪化模型，模擬NAFLD的脂肪沉積現(xiàn)象。研究Gen對(duì)脂肪化模型細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(Triglyceride，TG)的調(diào)節(jié)效果和調(diào)控ATGL的表達(dá)與活性作用。研究Gen通過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（PPARs）調(diào)控脂代謝的信號(hào)途徑，為Gen調(diào)脂保肝及其對(duì)PPARs調(diào)控機(jī)理提供依據(jù)，促進(jìn)食物預(yù)防脂肪肝及探討防治NAFLD的藥理靶點(diǎn)研究。
　　方法:用人肝臟正常細(xì)

3、胞L-02、人肝癌細(xì)胞HepG2、Hep3b及小鼠前脂肪細(xì)胞3T3-L1等4種細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)步驟進(jìn)行:第一步，利用不同劑量油酸誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)脂肪過(guò)度沉積，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)TG含量的變化，細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，細(xì)胞活力變化、細(xì)胞培養(yǎng)液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性、細(xì)胞培養(yǎng)液中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性等生化指標(biāo)考察OA誘導(dǎo)細(xì)胞脂變的效果，綜合各種因素建立合適的細(xì)胞脂變模型;第二步，利用Gen處理脂變的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞內(nèi)TG含量測(cè)定

4、，實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證Gen對(duì)脂變細(xì)胞的脂滴降解作用與效果;第三步，Gen處理脂肪化的細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ATGL、HSL、PPARα、PPARγ的mRNA表達(dá)量，ELISA試驗(yàn)測(cè)定PPARα、PPARγ蛋白表達(dá)，探討Gen影響肝細(xì)胞調(diào)控TG的機(jī)制途徑。
　　結(jié)果:(1)不同濃度的OA均能作用于Hep G2，Hep3b，L-02和3T3-L1四種細(xì)胞，使之產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積的現(xiàn)象。低于1mM的OA劑量能誘導(dǎo)出低水平的脂肪堆積，但

5、細(xì)胞上清液的酶學(xué)指標(biāo)變化差異不顯著;當(dāng)OA濃度大于1mM時(shí)，細(xì)胞上清液酶學(xué)活性變化差異顯著，但部分細(xì)胞死亡;使用1mM的OA誘導(dǎo)建立細(xì)胞脂變模型效果較好。(2) Gen能顯著地降低脂肪化細(xì)胞內(nèi)的TG含量，TG的減少量與Gen濃度呈顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系。(3) Gen可以上調(diào)PPARα、PPARγ的mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)含量，同時(shí)顯示ATGL、HSL的mRNA表達(dá)相應(yīng)提高。
　　結(jié)論:使用1mM濃度的OA誘導(dǎo)建立細(xì)胞脂肪化模型較為