9-甲氧基喜樹堿(MCPT)抗腫瘤作用及其機(jī)制研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩104頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、喜樹堿(Camptothecin,CPT)由于高效、廣譜的抗腫瘤活性而位居癌癥治療前列,但明顯的毒副作用限制了它在臨床上的使用,因而開發(fā)抗腫瘤活性強(qiáng)、毒副作用小的衍生物成為了國內(nèi)外研究熱點(diǎn)。9-甲氧基喜樹堿(9-Methoxycamptothecin,MCPT),一種喜樹堿衍生物,體內(nèi)外試驗(yàn)均證實(shí)有明顯的抗多種腫瘤活性,但對其有關(guān)細(xì)胞和分子方面的機(jī)制研究極少。本課題首先體外評價了9-甲氧基喜樹堿的抗腫瘤細(xì)胞活性,并從9-甲氧基喜樹堿誘導(dǎo)

2、腫瘤細(xì)胞凋亡、影響DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶活性及其與DNA分子相互作用等三個方面進(jìn)行了作用機(jī)制的研究。
  1.評價9-甲氧基喜樹堿體外抗腫瘤活性。結(jié)果表明,9-甲氧基喜樹堿抑制7種腫瘤細(xì)胞系,呈劑量依賴性。其中,人卵巢癌細(xì)胞A2780和人宮頸癌細(xì)胞Hela對9-甲氧基喜樹堿最為敏感,其IC50值分別為79±21nM和151±61nM,明顯低于陽性對照藥物10-羥基喜樹堿(Hydroxycamptothecin,HCPT)。選取這兩種細(xì)胞

3、系開展后續(xù)作用機(jī)制研究。
  2.研究了9-甲氧基喜樹堿誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用及其機(jī)制。結(jié)果表明:(1)9-甲氧基喜樹堿處理A2780和Hela細(xì)胞后,熒光顯微鏡下觀察到誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測到明顯的早期和晚期凋亡細(xì)胞。9-甲氧基喜樹堿誘導(dǎo)A2780細(xì)胞的早期凋亡和總凋亡率增加具有時間-劑量依賴性;(2)9-甲氧基喜樹堿處理A2780和Hela細(xì)胞24h后即表現(xiàn)出強(qiáng)的G2/M期阻滯。1×IC50濃度的9-甲氧基喜樹堿處理A278

4、0細(xì)胞24h后對G2/M期阻滯最明顯,達(dá)到81.93%;(3)9-甲氧基喜樹堿能使A2780和Hela細(xì)胞中產(chǎn)生活性氧(ROS)明顯增多。A2780細(xì)胞中ROS產(chǎn)生量最高達(dá)到對照組的5.22倍,Hela細(xì)胞中最高為2.65倍;(4)9-甲氧基喜樹堿能不同程度激活caspase-3,-8和-9。在A2780細(xì)胞中對caspase-9酶激活程度最強(qiáng),是對照組細(xì)胞的15倍。Hela細(xì)胞中caspase-3的酶活性被顯著提高,約為對照組細(xì)胞的8

5、倍;(5)實(shí)時定量PCR檢測到9-甲氧基喜樹堿調(diào)節(jié)了17個內(nèi)、外源性細(xì)胞凋亡通路及細(xì)胞周期相關(guān)基因。其中對細(xì)胞周期調(diào)控基因p21,p27和cyclinE上調(diào)較顯著;且明顯上調(diào)參與外源性細(xì)胞凋亡通路的TNFα、Fas和FasL;同時還調(diào)節(jié)了主要參與內(nèi)源性細(xì)胞凋亡通路的bcl-2家族有關(guān)基因表達(dá)水平;(6)Westernblot檢測到TNFα,Fas,P53和P27的蛋白表達(dá)水平上調(diào),與其基因水平調(diào)節(jié)一致。綜上所述,9-甲氧基喜樹堿可通過調(diào)

6、節(jié)細(xì)胞周期調(diào)控蛋白使細(xì)胞周期阻滯于G2/M期,并增加ROS的產(chǎn)生、調(diào)節(jié)bcl-2家族相關(guān)基因激活caspase-9,從而啟動內(nèi)源性細(xì)胞凋亡通路;同時激活了caspase-8啟動以TNFα和Fas/FasL為主的外源性細(xì)胞凋亡通路。以上兩條通路共同激活caspase-3,最終導(dǎo)致A2780和Hela細(xì)胞凋亡。
  3.研究了9-甲氧基喜樹堿對DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ和Ⅱ活性的影響。結(jié)果顯示,100μM的9-甲氧基喜樹堿表現(xiàn)出對拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ

7、明顯的抑制作用,與陽性對照藥物喜樹堿一樣,可使超螺旋DNA產(chǎn)生明顯的缺刻型DNA條帶。不同濃度的9-甲氧基喜樹堿均未表現(xiàn)出對拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的抑制作用(與陽性對照藥物依托泊苷相比)。值得注意的是,100μM的9-甲氧基喜樹堿能單獨(dú)作用于超螺旋DNA并產(chǎn)生明顯的缺刻型DNA產(chǎn)物,表明9-甲氧基喜樹堿在沒有拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ存在的情況下也能作用于DNA。提示,9-甲氧基喜樹堿的這種直接結(jié)合DNA的能力很有可能是其抗腫瘤活性強(qiáng)的一種重要機(jī)制。
 

8、 4.采用光譜法研究了9-甲氧基喜樹堿與DNA分子相互作用。結(jié)果表明,(1)紫外-可見吸收光譜顯示,隨著不斷滴加CT-DNA,9-甲氧基喜樹堿最大吸收峰出現(xiàn)了增色效應(yīng),譜帶未發(fā)生偏移,表明其與DNA的作用屬于外部鍵合模式(溝槽作用和/或靜電作用)。9-甲氧基喜樹堿處理CT-DNA前后體系的解鏈溫度(meltingtemperature,Tm)值升高不明顯,也支持外部鍵合模式;(2)熒光光譜顯示,隨著CT-DNA濃度不斷增加,9-甲氧基喜

9、樹堿熒光強(qiáng)度不斷增強(qiáng),沒有發(fā)生明顯光譜偏移現(xiàn)象,支持外部鍵合模式;(3)9-甲氧基喜樹堿與CT-DNA相互作用的圓二色譜顯示,9-甲氧基喜樹堿加入后,體系的正峰有小的提升,而其負(fù)峰有較明顯的回落并伴有輕微的吸收峰紅移現(xiàn)象。由于負(fù)峰變化程度大于正峰,表明兩者結(jié)合以溝槽模式為主。綜上可知,9-甲氧基喜樹堿與CT-DNA的結(jié)合方式以溝槽模式為主。
  綜合以上研究結(jié)果表明,9-甲氧基喜樹堿具有明顯的抗多種腫瘤細(xì)胞活性,其作用機(jī)制主要是通

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論