甜橙油中特征香氣成分的分離及其生物活性研究.pdf

1、甜橙油常用冷磨法、冷壓法、水蒸氣蒸餾法或者二氧化碳超臨界流體萃取法等方法從全果或果皮中提取，香氣穩(wěn)定，是一種常用的天然香料，在食品、藥品以及化妝品行業(yè)也具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。甜橙油是100多種化合物組成的天然混合物，其中檸檬烯的含量可達(dá)到95％，但對(duì)香氣的貢獻(xiàn)較小且不穩(wěn)定，其他一些低含量成分如辛醛、芳樟醇、癸醛、巴倫西亞桔烯和檸檬醛卻是甜橙油香氣的主要來(lái)源，因此從甜橙油中分離這幾種特征香氣成分具有重要的意義，同時(shí)該致香成分是否具有一定生物

2、活性也值得進(jìn)一步研究。
　　第一章概括介紹了植物精油的生物活性包括抑菌、抗氧化和細(xì)胞毒性等；分子蒸餾的原理及其應(yīng)用；甜橙油及其特征香氣成分。
　　第二章介紹了采用分子蒸餾和柱層析相結(jié)合的方法從甜橙油中分離辛醛、芳樟醇、癸醛、巴倫西亞桔烯和檸檬醛。
　　首先采用分子蒸餾法（短程分子蒸餾器）對(duì)甜橙精油中的特征香氣成分如辛醛、芳樟醇、癸醛和巴倫西亞桔烯進(jìn)行了富集研究，同時(shí)采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。通

3、過(guò)單因素試驗(yàn)對(duì)影響分子蒸餾的主要因素，即蒸餾溫度、蒸餾壓力、刮膜轉(zhuǎn)速和進(jìn)料流速進(jìn)行了考察，綜合單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)確定分子蒸餾最佳工藝參數(shù)為：蒸餾溫度30℃、蒸餾壓力150Pa、刮膜轉(zhuǎn)速200r/min和進(jìn)料流速8mL/min。在此條件下，按歸一化法測(cè)定相對(duì)百分含量，辛醛的質(zhì)量分?jǐn)?shù)從原來(lái)的0.46%提升到1.55%、癸醛的質(zhì)量分?jǐn)?shù)從原來(lái)的0.59%提升到9.11%、芳樟醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)從原來(lái)的0.71%提升到5.84%、巴倫西亞橘烯的質(zhì)量分

4、數(shù)從原來(lái)的0.24%提升到7.96%。因此，分子蒸餾技術(shù)可用于甜橙油中特征香氣成分的高效富集。
　　分子蒸餾富集到的產(chǎn)物采用硅膠柱色譜對(duì)其進(jìn)行逐級(jí)分離，同時(shí)采用氣相色譜（GC）對(duì)分離產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。用不同的洗脫劑洗脫層析柱后得到5種產(chǎn)物，經(jīng)測(cè)定可知產(chǎn)物1為82.25%的巴倫西亞橘烯、產(chǎn)物2為73.36%的癸醛、產(chǎn)物3為78.12%的檸檬醛、產(chǎn)物4為78.12%的辛醛、產(chǎn)物5為90.61%的芳樟醇。
　　第三章介紹了甜橙油及其分

5、離產(chǎn)物在抑菌、抗氧化和細(xì)胞毒性三方面的生物活性。
　　甜橙油及其分離產(chǎn)物采用抑菌圈法研究了其對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、釀酒酵母、青霉以及黑曲霉5種常見(jiàn)菌群的抑菌活性，并用96孔板法分析測(cè)定了它們的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）。研究結(jié)果表明甜橙油、產(chǎn)物2（73.36%癸醛）、產(chǎn)物3（78.12%檸檬醛）、產(chǎn)物4（78.12%辛醛）和產(chǎn)物5（90.61%芳樟醇）對(duì)除青霉外的幾種菌均具有抑制活性，產(chǎn)物1（82.25%

6、巴倫西亞橘烯）對(duì)這5種菌沒(méi)有抑菌活性。
　　甜橙油及其分離產(chǎn)物抗氧化活性實(shí)驗(yàn)選用1,1-二苯基-2-苦基苯肼（DPPH）清除法和普魯士藍(lán)（PB）法。研究結(jié)果表明產(chǎn)物1（82.25%巴倫西亞橘）、產(chǎn)物2（73.36%癸醛）、產(chǎn)物3（78.12%檸檬醛）和產(chǎn)物5（90.61%芳樟醇）具有抗氧化活性，但低于甜橙油的抗氧化活性。
　　甜橙油及其及分離產(chǎn)物的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)選擇Hela細(xì)胞通過(guò)MTT法對(duì)其進(jìn)行測(cè)定。甜橙油及其這幾種產(chǎn)物的I

7、C50分別為5.51±0.21、4.57±0.47、3.24±0.22、32.56±0.20、3.78±0.35和3.50±0.17μg/mL。研究結(jié)果表明甜橙油及其分離產(chǎn)物除產(chǎn)物3（78.12%檸檬醛）外均對(duì)Hela細(xì)胞有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，IC50值均小于20μg/mL。
　　本課題通過(guò)分子蒸餾和柱層析相結(jié)合的辦法分離得到了5種產(chǎn)物，分別為產(chǎn)物1（82.25%巴倫西亞橘烯）、產(chǎn)物2（73.36%癸醛）、產(chǎn)物3（78.12%檸檬醛）